本文關鍵詞：采用弓形蟲T7噬菌體文庫篩選黏附相關蛋白基因的研究

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【摘要】：目的用原代培養(yǎng)的貓腸上皮細胞(IECs)對已構建的弓形蟲T7噬菌體展示文庫進行篩選,期望得到將新的弓形蟲入侵宿主細胞黏附相關蛋白基因。方法將貓IECs與混有噬菌體文庫的DMEM培養(yǎng)基孵育培養(yǎng)后進行洗脫篩選,再與宿主菌BLT5403共同培養(yǎng)擴增文庫,篩選噬菌體DNA并進行基因序列測定與分析。結(jié)果洗脫下的噬菌體滴度從第1輪7.6×105到第5輪的3.6×107,富集了230倍,非特異性結(jié)合和親和力低的噬菌體被成功去除;核苷酸序列分析表明含插入片段為394bp的噬菌體富集量最大,經(jīng)檢索為弓形蟲棒狀體蛋白基因,是棒狀體蛋白基因ROP2和ROP8的共有序列。結(jié)論初步證明弓形蟲棒狀體蛋白為黏附相關蛋白基因,其表達產(chǎn)物為ROP2。
【作者單位】： 山東省醫(yī)學科學院山東省寄生蟲病防治研究所;濟南大學;
【關鍵詞】： 弓形蟲 貓腸上皮細胞 噬菌體 黏附蛋白 棒狀體蛋白
【基金】：山東省自然科學基金項目(No.ZR2010HQ062)
【分類號】：R392
【正文快照】： 剛地弓形蟲(Toxoplasma gondii)屬于專性細胞內(nèi)寄生原蟲,呈世界性分布,能夠感染幾乎所有溫血動物及人類。弓形蟲生活史復雜,宿主感染譜廣泛,貓及其他貓科動物是弓形蟲生活史中的唯一終末宿主[1]。有性生殖也只限于在貓科動物腸道上皮細胞(IECs)內(nèi)進行。貓感染弓形蟲后可排出大

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本文編號：729951