發(fā)布時間：2017-08-23 23:06

  本文關(guān)鍵詞：淫羊藿提取物對Cuprizone介導(dǎo)的髓鞘脫失動物模型的影響及機(jī)制初探

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【摘要】：目的:多發(fā)硬化是以炎性脫髓鞘為主要病理改變的自身免疫性疾病,影像學(xué)研究發(fā)現(xiàn)該病在腦和脊髓白質(zhì)可見多個脫髓鞘病灶,如何保護(hù)髓鞘脫失是治療多發(fā)性硬化的關(guān)鍵。中醫(yī)素有“補(bǔ)腎填髓”理論,補(bǔ)腎的中藥是否能夠保護(hù)髓鞘的脫失?本課題將研究補(bǔ)腎中藥淫羊藿的有效成分淫羊藿黃酮(epimedium flavonoids,EF)、淫羊藿苷(icariin,ICA)對髓鞘脫失的影響并探討其可能的作用機(jī)制,為進(jìn)一步研究開發(fā)抗多發(fā)性硬化髓鞘脫失的新型藥物提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:本實(shí)驗(yàn)以摻入0.2%雙環(huán)己酮草酰二腙(cuprizone,CPZ)的特制飼料飼喂雌性C57BL/6J小鼠誘發(fā)中樞白質(zhì)(如胼胝體)髓鞘脫失的實(shí)驗(yàn)動物模型:飼喂含CPZ的特制飼料6周引發(fā)實(shí)驗(yàn)動物白質(zhì)急性可逆性脫髓鞘;飼喂含CPZ的特制飼料連續(xù)12周引發(fā)動物不可逆性慢性脫髓鞘;受試藥物在髓鞘脫失前經(jīng)灌胃給予,連續(xù)給藥3~4周以觀察藥物對急、慢性髓鞘脫失的影響。為進(jìn)一步觀察受試藥物對髓鞘再生的影響,在飼喂含CPZ特制飼料引發(fā)髓鞘脫失最為嚴(yán)重的第5周末,將模型組及給藥組的動物飼料改為正常飼料以誘發(fā)其髓鞘脫失的可逆性恢復(fù),觀察藥物對髓鞘再生是否具有促進(jìn)作用。髓鞘蛋白含量采用western blotting(蛋白免疫印跡)的方法檢測;髓鞘脫失情況采用Oil Red O(油紅O)染色法、LFB-PAS(堅(jiān)牢藍(lán)-糖原)染色法、髓鞘堿性蛋白(myelin basic protein,MBP)免疫組織化學(xué)染色法檢測;成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞(GST-pi標(biāo)記)、少突膠質(zhì)細(xì)胞前體細(xì)胞(NG2標(biāo)記)、胰島素樣生長因子(insulin-like growth factor-1,IGF-1)、腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)均采用免疫組織化學(xué)染色法檢測;在髓鞘再生修復(fù)模型上檢測小膠質(zhì)細(xì)胞(Iba-1標(biāo)記)、星形膠質(zhì)細(xì)胞(GFAP標(biāo)記)、腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)的表達(dá)采用組織免疫熒光染色法。結(jié)果:1.CPZ能夠成功誘導(dǎo)C57/BL6J小鼠中樞白質(zhì)(胼胝體)的髓鞘脫失,EF能夠增加胼胝體部位髓鞘的染色面積和著色深度,EF降低少突膠質(zhì)細(xì)胞前體細(xì)胞(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)的表達(dá)、促進(jìn)髓鞘脫失部位成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞(oligodendrocytes,OLs)的表達(dá)、促進(jìn)神經(jīng)營養(yǎng)因子IGF-1的表達(dá)。2.在CPZ誘導(dǎo)的急、慢性髓鞘脫失動物模型中,ICA皆能夠有效增加胼胝體部位髓鞘的染色面積和著色深度,ICA亦能夠降低OPCs的表達(dá)、促進(jìn)髓鞘脫失部位OLs的表達(dá)、促進(jìn)神經(jīng)營養(yǎng)因子BDNF的表達(dá)。3.在髓鞘再生修復(fù)小鼠模型上ICA能夠有效增加CPZ引起的髓鞘特異蛋白髓鞘堿性蛋白MBP含量的降低。ICA也能有效抑制小膠質(zhì)細(xì)胞(Microglia)以及星形膠質(zhì)細(xì)胞(Astroglia)的過度活化。此外,ICA下調(diào)有CPZ誘導(dǎo)的Olig2的表達(dá)。結(jié)論:1.淫羊藿提取物淫羊藿苷(ICA)、淫羊藿黃酮(EF)對CPZ介導(dǎo)的急、慢性髓鞘脫失動物模型均有較好的保護(hù)作用,能夠有效地保護(hù)髓鞘脫失,其作用機(jī)制可能與其降低少突膠質(zhì)前體細(xì)胞的數(shù)量、增加成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量、促進(jìn)神經(jīng)營養(yǎng)因子IGF-1、BDNF等的表達(dá)有關(guān)。2.淫羊藿中有效單體成分ICA還具有促進(jìn)髓鞘再生修復(fù)的作用,調(diào)節(jié)小膠質(zhì)細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞的活化可能參與了ICA的促髓鞘再生修復(fù)機(jī)制。
【關(guān)鍵詞】：髓鞘脫失模型 銅離子螯合劑 淫羊藿苷 淫羊藿黃酮
【學(xué)位授予單位】：安徽中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R285.5;R-332
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• ABSTRACT8-10
• 英文縮略詞10-12
• 前言12-15
• 一 實(shí)驗(yàn)材料及方法15-29
• 1 實(shí)驗(yàn)動物15
• 2 實(shí)驗(yàn)抗體及試劑15-16
• 3 主要儀器設(shè)備16-17
• 4 實(shí)驗(yàn)方法17-29
• 4.1 特制飼料制備17
• 4.2 動物分組及給藥17-19
• 4.3 Western Blot（蛋白免疫印跡）19-24
• 4.4 病理染色24-26
• 4.5 免疫組織化學(xué)染色26-28
• 4.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及處理方法28-29
• 二 實(shí)驗(yàn)結(jié)果29-61
• 1 EF對Cuprizone介導(dǎo)的急性髓鞘脫失的影響29-39
• 1.1 CPZ對小鼠急性髓鞘脫失隨時間變化的影響29
• 1.2 EF對CPZ介導(dǎo)的胼胝體急性髓鞘脫失的影響29-33
• 1.3 EF對CPZ介導(dǎo)的急性髓鞘脫失成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞（OLs）和少突膠質(zhì)前體細(xì)胞（OPCS）的影響33-37
• 1.4 EF對CPZ介導(dǎo)的急性髓鞘脫失動物模型胰島素樣生長因子（IGF-1）表達(dá)的影響37-39
• 2 ICA對CPZ介導(dǎo)的急、慢性髓鞘脫失的影響39-53
• 2.1 ICA對CPZ介導(dǎo)的胼胝體急性髓鞘脫失的影響39-42
• 2.2 ICA對CPZ介導(dǎo)的胼胝體慢性髓鞘脫失的影響42-45
• 2.3 ICA對CPZ介導(dǎo)的急性髓鞘脫失成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞（OLs）和少突膠質(zhì)前體細(xì)胞（OPCS）的影響45-49
• 2.4 ICA對CPZ介導(dǎo)的急性髓鞘脫失動物模型腦源性神經(jīng)生長因子（BDNF）表達(dá)的影響49-53
• 3 ICA 對 CPZ 介導(dǎo)的小鼠髓鞘再生修復(fù)模型的影響及機(jī)制初探53-61
• 3.1 CPZ 介導(dǎo)的急性髓鞘脫失動物模型中髓鞘含量隨時間的變化53-57
• 3.2 ICA 對 CPZ 介導(dǎo)的髓鞘再生的影響57-59
• 3.3 ICA對CPZ介導(dǎo)的髓鞘再生小鼠模型腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞活化的影響59-61
• 三 結(jié)論61-62
• 四 討論62-66
• 參考文獻(xiàn)66-72
• 附錄72-76
• 綜述76-83
• 參考文獻(xiàn)81-83
• 個人簡歷83
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文情況83-84
• 致謝84

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 郭寶林，，王春蘭，肖培根，陳建民;HPLC法分析淫羊藿的黃酮類成分[J];西北藥學(xué)雜志;1996年05期

2 孟憲麗,張藝,李建亞,沈映君,胡鵬,肖菁;淫羊藿總黃酮對老年大鼠神經(jīng)內(nèi)分泌免疫調(diào)節(jié)作用的研究[J];中藥藥理與臨床;1998年04期

本文編號：727805