本文關(guān)鍵詞：融合蛋白LTβR-Fc對(duì)卵清蛋白誘發(fā)的皮炎小鼠模型的影響

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【摘要】：特應(yīng)性皮炎(atopic dermatitis,AD)是一種T細(xì)胞介導(dǎo)的慢性復(fù)發(fā)性炎癥性皮膚病,常伴發(fā)哮喘、過(guò)敏性鼻炎和結(jié)膜炎等一系列癥狀,以劇烈瘙癢和睡眠障礙為主要特征。其發(fā)病機(jī)制尚不明確,目前認(rèn)為T(mén)細(xì)胞免疫異常在A(yíng)D的發(fā)病環(huán)節(jié)中扮演了重要角色,AD的發(fā)病、皮損的持續(xù)存在與T淋巴細(xì)胞的過(guò)度活化以及產(chǎn)生的細(xì)胞因子功能異常有關(guān)。共刺激分子在T淋巴細(xì)胞活化過(guò)程中起著至關(guān)重要的作用。研究中針對(duì)其受體-配體結(jié)合的阻斷策略既可用于急性移植免疫排斥反應(yīng)的預(yù)防,也可用于自身免疫抑制的維持。單純皰疹病毒侵入介質(zhì)配體(herpesvirus entry mediator ligand,HVEML,或稱(chēng)LIGHT)是新近發(fā)現(xiàn)的腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor,TNF)配體超家族的一員,它參與許多炎癥性疾病的發(fā)病過(guò)程,其受體一般表達(dá)于活化的T淋巴細(xì)胞,屬于單純皰疹病毒侵入介質(zhì)(herpesvirus entry mediator,HVEM)。研究證實(shí),LIGHT共刺激分子參與了炎癥性腸疾病、強(qiáng)直性脊柱炎與類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等疾病的發(fā)病進(jìn)程,而特應(yīng)性皮炎患者外周血血清中LIGHT的表達(dá)水平較健康者顯著上調(diào),且與患者血清內(nèi)IgE的水平以及濕疹面積與嚴(yán)重度指數(shù)(eczema area and severity index,EASI)顯著相關(guān)。因此,本研究擬探討單純皰疹病毒侵入介質(zhì)配體信號(hào)通路LIGHT-HVEM阻斷抗體LTβR-Fc融合蛋白對(duì)卵清蛋白誘發(fā)的皮炎小鼠模型的影響,以進(jìn)一步探索LIGHT-HVEM信號(hào)通路在A(yíng)D發(fā)病機(jī)制中的作用。第一部分IL-4、IL-5和IFN-γ在皮炎小鼠模型中的表達(dá)【目的】檢測(cè)LIGHT-HVEM阻斷抗體LTβR-Fc融合蛋白建立的皮炎小鼠模型皮損處及脾細(xì)胞上清液內(nèi)白介素(IL)-4、IL-5和干擾素γ(IFN-γ)的表達(dá),并分析LIGHT-HVEM信號(hào)通路在A(yíng)D發(fā)病機(jī)制中的作用�！痉椒ā繉ALB/c小鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組(以100μl生理氯化鈉溶液進(jìn)行刺激)、模型組(將100μg卵清蛋白溶于100μl生理氯化鈉溶液中進(jìn)行刺激)以及阻斷劑組(在卵清蛋白致敏前24 h將100μg LTβR-Fc溶于100μl生理氯化鈉溶液作為阻斷藥物進(jìn)行刺激),于造模結(jié)束時(shí)處死各組小鼠,用rt-pcr法檢測(cè)小鼠皮損處il-4、il-5和ifn-γ的mrna表達(dá)情況,用elisa法檢測(cè)小鼠脾細(xì)胞上清液內(nèi)il-4、il-5和ifn-γ的蛋白表達(dá)情況�！窘Y(jié)果】融合蛋白ltβr-fc顯著抑制了卵清蛋白誘發(fā)的皮炎小鼠模型的炎癥反應(yīng)。皮炎小鼠模型組與阻斷劑組小鼠皮損處il-4mrna(1.81±0.25vs0.88±0.25)、il-5mrna(1.24±0.26vs0.75±0.15)、ifn-γmrna(1.11±0.19vs0.62±0.09)水平差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),脾細(xì)胞上清液內(nèi)il-4蛋白[(20.12±5.39)ng/lvs(9.58±1.44)ng/l]、il-5蛋白[(22.77±4.07)ng/lvs(11.37±2.02)ng/l]、ifn-γ蛋白[(23930±44.20)ng/lvs(16167±950.40)ng/l]水平差異亦具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)�！窘Y(jié)論】融合蛋白阻斷抗體ltβr-fc通過(guò)阻斷l(xiāng)ight-hvem信號(hào)通路可以顯著下調(diào)卵清蛋白誘發(fā)的皮炎小鼠模型的il-4、il-5和ifn-γ,提示light-hvem可以作為特應(yīng)性皮炎的潛在治療靶點(diǎn)。第二部分皮炎小鼠模型血清中總ige、igg1以及卵清蛋白特異性ige、igg1的表達(dá)水平【目的】評(píng)估light-hvem阻斷抗體ltβr-fc融合蛋白建立的皮炎小鼠模型的濕疹面積與嚴(yán)重度指數(shù)(eczemaareaandseverityindex,easi),并檢測(cè)皮炎小鼠模型血清中總的以及卵清蛋白特異性的ige、igg1的表達(dá),分析light-hvem信號(hào)通路在ad發(fā)病機(jī)制中的作用�！痉椒ā繉alb/c小鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組(以100μl生理氯化鈉溶液進(jìn)行刺激)、模型組(將100μg卵清蛋白溶于100μl生理氯化鈉溶液中進(jìn)行刺激)以及阻斷劑組(在卵清蛋白致敏前24h將100μgltβr-fc溶于100μl生理氯化鈉溶液作為阻斷藥物進(jìn)行刺激),在開(kāi)始致敏后第0、4、8、12、15、20、23、27、31、34天分別對(duì)各組實(shí)驗(yàn)小鼠進(jìn)行病情嚴(yán)重程度評(píng)分,同時(shí)測(cè)量皮損面積大小,最后于造模結(jié)束行眼眶取血,提取血清后處死各組小鼠,用elisa方法檢測(cè)血清內(nèi)總的ige、igg1以及卵清蛋白特異性的ige、igg1的表達(dá)水平�！窘Y(jié)果】融合蛋白ltβr-fc顯著抑制了卵清蛋白誘發(fā)的皮炎小鼠模型的炎癥反應(yīng)。與模型組相比,阻斷劑組小鼠皮損面積顯著減少(P0.05),EASI明顯降低(P0.05)。皮炎小鼠模型組與阻斷劑組血清內(nèi)總的IgE[(32277.00±407.53)μg/L vs27446367±2052.64)μg/L]和IgG1[(2323.33±502.43)μg/L vs(1296.33±32.72)μg/L]水平差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,血清內(nèi)卵清蛋白特異性的IgE[(0.84±0.11)μg/L vs(0.46±0.10)μg/L]和IgG1[(0.86±0.07)μg/L vs(0.62±0.10)μg/L]亦具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義�！窘Y(jié)論】融合蛋白LTβR-Fc可以通過(guò)阻斷共刺激分子LIGHT,促使皮炎模型EASI降低,同時(shí)血清總的與卵清蛋白特異性的IgE、IgG1顯著下調(diào),提示LIGHT-HVEM信號(hào)通路可作為特應(yīng)性皮炎的潛在治療靶點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：特應(yīng)性皮炎 卵清蛋白 LIGHT-HVEM信號(hào)通路
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R758.2;R-332
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-12
• 研究背景12-20
• 一 共刺激分子LIGHT及其配體HVEM12-15
• 二 LIGHT-HVEM信號(hào)通路與炎癥性疾病15-16
• 參考文獻(xiàn)16-20
• 第一部分 IL-4、IL-5 和IFN-Γ在皮炎小鼠模型中的表達(dá)20-26
• 一 材料和方法20-22
• 二 結(jié)果22-24
• 三 討論24-25
• 參考文獻(xiàn)25-26
• 第二部分 皮炎小鼠模型血清中總IGE、IGG1以及卵清蛋白特異性IGE、IGG1的表達(dá)水平26-33
• 一 材料和方法26-28
• 二 結(jié)果28-31
• 三 討論31-32
• 參考文獻(xiàn)32-33
• 結(jié)論33-34
• 綜述34-57
• 參考文獻(xiàn)44-57
• 碩士期間發(fā)表的論文57-58
• 本課題的受資助情況58-59
• 縮寫(xiě)詞表59-60
• 致謝60-61

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本文編號(hào)：727231