本文關(guān)鍵詞：大鼠叉頭蛋白轉(zhuǎn)錄因子O1基因的shRNA慢病毒載體構(gòu)建與RNA干擾效率的鑒定

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【摘要】：目的構(gòu)建針對大鼠叉頭蛋白轉(zhuǎn)錄因子O1(FoxO1)基因的shRNA慢病毒載體,并在大鼠系膜細(xì)胞(RMCs)上鑒定其沉默效率。方法利用四質(zhì)粒合成法合成慢病毒載體。分別用陰性對照慢病毒載體(LV-shNC-GFP組)、shRNA慢病毒載體(LV-shRNA-FoxO1組)和感染增強劑(NC組)處理RMCs。72h后,采用流式細(xì)胞儀檢測綠色熒光蛋白(GFP)陽性表達(dá)率。采用熒光定量PCR檢測FoxO1mRNA表達(dá)情況。15d后,采用蛋白免疫印跡法檢測FoxO1蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果 LV-shNC-GFP、LV-shRNA-FoxO1組GFP陽性表達(dá)率分別為87.4%、95.8%;LV-shRNA-FoxO1組FoxO1的mRNA與蛋白表達(dá)量較NC、LV-shNC-GFP組均降低(P0.05)。其mRNA及蛋白抑制率分別達(dá)到86.2%和77.3%,而LV-shNC-GFP、LV-shRNA-FoxO1組FoxO1的mRNA及蛋白表達(dá)量差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論成功構(gòu)建大鼠FoxO1基因的shRNA慢病毒載體能高效、穩(wěn)定地抑制FoxO1的表達(dá),為進(jìn)一步研究FoxO1的功能和作用機制奠定研究基礎(chǔ)。
【作者單位】： 鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院內(nèi)分泌科;
【關(guān)鍵詞】： 叉頭蛋白轉(zhuǎn)錄因子O 短發(fā)夾樣核糖核酸 慢病毒載體 系膜細(xì)胞 大鼠
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81050009)
【分類號】：R346
【正文快照】： 叉頭蛋白轉(zhuǎn)錄因子O1(FoxO1)是FoxO亞家族中主要成員之一。研究[1-3]表明,FoxO1在機體糖脂代謝、細(xì)胞增殖/凋亡、抗氧化應(yīng)激和腫瘤發(fā)生等過程中發(fā)揮重要作用。目前,關(guān)于FoxO1的功能及其作用機制仍需進(jìn)一步探討。以往,調(diào)節(jié)FoxO1表達(dá)的脂質(zhì)體介導(dǎo)法及腺病毒載體等轉(zhuǎn)基因技術(shù)分別，

本文編號：722765