本文關鍵詞：組成型表達重組人C-反應蛋白的畢赤酵母菌株構建

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【摘要】：目的:構建組成型表達重組人C-反應蛋白(Recombinant human C-reactive protein,rhCRP)的畢赤酵母工程菌株,表達、純化rhCRP并鑒定其免疫反應性。方法:將設計合成的rhCRP基因克隆到表達載體pGAPZαA上并轉(zhuǎn)化至畢赤酵母X-33中進行組成型分泌表達,通過His親和層析柱純化rhCRP。分別采用SDS-PAGE、Western blot和間接ELISA法檢測目的蛋白并鑒定其免疫反應性。結(jié)果:重組表達載體pGAPZαA/rhCRP經(jīng)酶切及DNA測序鑒定構建成功。重組畢赤酵母工程菌株成功組成型表達23kDa的rhCRP,27h即達到最大表達水平,表達量約3mg/L。經(jīng)一步分離純化獲得純度為96.58%的rhCRP,經(jīng)間接ELISA檢測表明其具有免疫反應性。結(jié)論:成功構建了組成型分泌表達rhCRP的畢赤酵母菌株,為進一步自主研發(fā)人CRP檢測試劑奠定了基礎。
【作者單位】： 大連大學醫(yī)學院醫(yī)學研究中心;大連大學生命科學與技術學院;
【關鍵詞】： C-反應蛋白 畢赤酵母 組成型表達 免疫反應性
【基金】：國家自然基金項目(“單鏈抗體在大腸桿菌體內(nèi)定點糖基化及其通過糖鏈以共價鍵定向固定的研究”,No.31070822/C080602) 遼寧省高等學�？蒲杏媱濏椖�(“糖基化多肽聚合物的生物合成及其抑制毒素的活性研究”,No.L2010015)資助
【分類號】：R378
【正文快照】： 0引言C-反應蛋白是一種典型的急性時相反應蛋白,1930年由美國的Tillett WS和Francis T博士首次發(fā)現(xiàn),因其和肺炎球菌的C多糖發(fā)生沉淀反應而得名[1]。CRP不僅是指示機體炎性反應狀態(tài)的一個敏感而可靠的指標,而且也是一個理想的心血管疾病發(fā)病診斷及發(fā)病風險預測指標[2-5]。目前

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【相似文獻】

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本文編號：721893