本文關(guān)鍵詞：組成型表達(dá)重組人C-反應(yīng)蛋白的畢赤酵母菌株構(gòu)建

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【摘要】：目的:構(gòu)建組成型表達(dá)重組人C-反應(yīng)蛋白(Recombinant human C-reactive protein,rhCRP)的畢赤酵母工程菌株,表達(dá)、純化rhCRP并鑒定其免疫反應(yīng)性。方法:將設(shè)計(jì)合成的rhCRP基因克隆到表達(dá)載體pGAPZαA上并轉(zhuǎn)化至畢赤酵母X-33中進(jìn)行組成型分泌表達(dá),通過His親和層析柱純化rhCRP。分別采用SDS-PAGE、Western blot和間接ELISA法檢測(cè)目的蛋白并鑒定其免疫反應(yīng)性。結(jié)果:重組表達(dá)載體pGAPZαA/rhCRP經(jīng)酶切及DNA測(cè)序鑒定構(gòu)建成功。重組畢赤酵母工程菌株成功組成型表達(dá)23kDa的rhCRP,27h即達(dá)到最大表達(dá)水平,表達(dá)量約3mg/L。經(jīng)一步分離純化獲得純度為96.58%的rhCRP,經(jīng)間接ELISA檢測(cè)表明其具有免疫反應(yīng)性。結(jié)論:成功構(gòu)建了組成型分泌表達(dá)rhCRP的畢赤酵母菌株,為進(jìn)一步自主研發(fā)人CRP檢測(cè)試劑奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 大連大學(xué)醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)研究中心;大連大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： C-反應(yīng)蛋白 畢赤酵母 組成型表達(dá) 免疫反應(yīng)性
【基金】：國家自然基金項(xiàng)目(“單鏈抗體在大腸桿菌體內(nèi)定點(diǎn)糖基化及其通過糖鏈以共價(jià)鍵定向固定的研究”,No.31070822/C080602) 遼寧省高等學(xué)校科研計(jì)劃項(xiàng)目(“糖基化多肽聚合物的生物合成及其抑制毒素的活性研究”,No.L2010015)資助
【分類號(hào)】：R378
【正文快照】： 0引言C-反應(yīng)蛋白是一種典型的急性時(shí)相反應(yīng)蛋白,1930年由美國的Tillett WS和Francis T博士首次發(fā)現(xiàn),因其和肺炎球菌的C多糖發(fā)生沉淀反應(yīng)而得名[1]。CRP不僅是指示機(jī)體炎性反應(yīng)狀態(tài)的一個(gè)敏感而可靠的指標(biāo),而且也是一個(gè)理想的心血管疾病發(fā)病診斷及發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)指標(biāo)[2-5]。目前

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【相似文獻(xiàn)】

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2 貝錦龍,王瑾雯,王s閼，

本文編號(hào)：721893