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TcpC通過促進活性氧的產(chǎn)生誘導巨噬細胞凋亡

發(fā)布時間:2017-08-22 16:47

  本文關鍵詞:TcpC通過促進活性氧的產(chǎn)生誘導巨噬細胞凋亡


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【摘要】:目的:研究含有Toll/interleukin 1 receptor結(jié)構(gòu)域的蛋白(TcpC)對巨噬細胞凋亡的影響,探討TcpC誘導巨噬細胞凋亡的分子機制。方法:通過Transwell將分泌TcpC的尿路致病大腸埃希菌CFT073野生株(TcpCwt)和敲除tcpc基因的CFT073突變株(TcpCmut)與小鼠巨噬細胞系J774A隔開共培養(yǎng),Annexin V/PI雙染法觀察不同數(shù)量和不同處理時間的TcpCwt和TcpCmut對J774A細胞凋亡的影響;活性氧染色觀察不同處理時間的TcpCwt和TcpCmut對J774A細胞內(nèi)活性氧水平的影響,Annexin V/PI雙染法觀察不同濃度N-乙酰半胱氨酸清除活性氧后TcpCwt和TcpCmut對J774A細胞凋亡的影響,Western blot法檢測0.1 mmol N-乙酰半胱氨酸處理前后與TcpCwt和TcpCmut共培養(yǎng)的J774A細胞內(nèi)caspase-3表達。結(jié)果:與對照組和TcpCmut組相比,TcpCwt在細菌數(shù)量為5×105和5×106以及處理時間為24 h和36 h時均可顯著促進J774A凋亡(均P0.01)。共培養(yǎng)24 h和36 h的TcpCwt組J774A細胞內(nèi)活性氧水平顯著高于對照組和TcpCmut組(均P0.01)。0.1 mmol和1 mmol N-乙酰半胱氨酸處理可顯著抑制TcpCwt對J774A細胞的促凋亡作用(均P0.01)。TcpCwt處理可顯著降低J774A細胞內(nèi)總caspase-3表達,而N-乙酰半胱氨酸處理可抑制與TcpCwt共培養(yǎng)的J774A細胞內(nèi)caspase-3裂解,提高總caspase-3表達水平。結(jié)論:TcpC可促進巨噬細胞內(nèi)活性氧產(chǎn)生,進而介導巨噬細胞凋亡。
【作者單位】: 浙江大學城市學院醫(yī)學院;
【關鍵詞】腸致病性大腸桿菌 巨噬細胞 活性氧 細胞凋亡 小鼠 基因敲除 細胞 培養(yǎng)的
【基金】:浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生科技計劃(2013KYA149) 浙江大學城市學院大學生科研項目(XZ2013562106)
【分類號】:R392
【正文快照】: 腎盂腎炎是最常見的上尿路感染,尿路致病性大腸埃希菌是其主要病原體[1]。近年研究發(fā)現(xiàn),尿路致病性大腸埃希菌CFT073菌株可分泌一種含有Toll/interleukin 1 receptor(TIR)結(jié)構(gòu)域的蛋白(TIR domain-containingprotein,TcpC),其與髓樣分化蛋白88(MyD88)結(jié)合,可阻斷Toll樣受體(TL

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