本文關(guān)鍵詞：BrdU標(biāo)記小鼠視網(wǎng)膜祖細(xì)胞的研究

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【摘要】：為了探討B(tài)rdU(5-Bromo-2′-deoxyuridine)體外標(biāo)記視網(wǎng)膜祖細(xì)胞(RPCs)的適宜濃度,將不同濃度BrdU(0.2、1、5和10μmol/L)與小鼠孕齡(E)17.5dRPCs共培養(yǎng)48h后,進(jìn)行增殖或分化培養(yǎng)。用免疫熒光檢測(cè)BrdU標(biāo)記百分率及細(xì)胞分化潛能,用細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測(cè)其增殖能力,用乳酸脫氫酶(LDH)法檢測(cè)其細(xì)胞毒性。結(jié)果發(fā)現(xiàn),0.2μmol/L BrdU不能明顯標(biāo)記RPCs,而1、5和10μmol/L 3種濃度BrdU均可有效標(biāo)記RPCs,且三者的標(biāo)記率相近(P0.05),1μmol/L BrdU無明顯細(xì)胞毒性,對(duì)RPCs增殖、分化亦無明顯影響,而5μmol/L和10μmol/L Br-dU均能抑制細(xì)胞增殖,并引起LDH釋放增加,說明有明顯的細(xì)胞毒性,10μmol/L BrdU還會(huì)阻礙RPCs向MAP2+神經(jīng)元方向分化,但對(duì)其向GFAP+或glutamine synthetase+神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞分化無明顯影響。本研究表明,1μmol/L BrdU既能有效標(biāo)記E17.5RPCs,又無顯著毒副作用,是較適宜的濃度。
【作者單位】： 廣東醫(yī)學(xué)院廣東省醫(yī)學(xué)分子診斷重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室衰老研究所;中山大學(xué)中山眼科中心眼科學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 視網(wǎng)膜祖細(xì)胞 BrdU 細(xì)胞毒性 分化
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(309766,81170846) 眼科學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室專項(xiàng)經(jīng)費(fèi)資助項(xiàng)目(QN-01) 廣東醫(yī)學(xué)院科技創(chuàng)新基金資助項(xiàng)目(STIF201102) 廣東省醫(yī)學(xué)科研基金資助項(xiàng)目(A2012420)
【分類號(hào)】：R329
【正文快照】： 引言BrdU(5-Bromo-2′-deoxyuridine)是胸腺嘧啶的衍生物,可在DNA合成期(S期)替代替胸腺嘧啶整合入新合成的DNA中,是評(píng)價(jià)細(xì)胞增殖能力及細(xì)胞示蹤的常用方法[1]。然而,BrdU對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)特性也有明顯的影響,可導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)毒性反應(yīng)、增殖抑制、分化異常、DNA突變及細(xì)胞周期延長(zhǎng)

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本文編號(hào)：716220