本文關(guān)鍵詞：HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid原核表達載體構(gòu)建及其基因工程菌種穩(wěn)定性的鑒定

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【摘要】：目的構(gòu)建HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid的原核表達載體并鑒定其基因工程菌種穩(wěn)定性。方法應(yīng)用PCR技術(shù)以pCMV-e23sFv-Fdt-tBid為模板擴增e23sFv-Fdt-tBid片段,并將其克隆入pET-22b原核表達載體;將該表達載體轉(zhuǎn)化BL21大腸桿菌并挑取表達蛋白較高的克隆菌,劃線接種傳代50次;通過革蘭氏染色方法、掃描電鏡形態(tài)觀察、菌種質(zhì)粒酶切鑒定及蛋白誘導(dǎo)表達的Western blot分析鑒定e23sFv-Fdt-tBid免疫促凋亡蛋白表達工程菌的穩(wěn)定性。結(jié)果成功構(gòu)建pET-22b-e23sFv-Fdt-tBid原核表達載體,并在BL21大腸桿菌中誘導(dǎo)表達;革蘭氏染色方法、掃描電鏡形態(tài)觀察、菌種質(zhì)粒酶切鑒定及Western blot法鑒定結(jié)果表明基因工程菌種穩(wěn)定性良好,可以穩(wěn)定表達免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid。結(jié)論成功構(gòu)建了HER2靶向免疫促凋亡蛋白原核表達載體,鑒定了表達該免疫促凋亡蛋白的基因工程菌種穩(wěn)定性,為HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid的應(yīng)用研究奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 第四軍醫(yī)大學(xué)基礎(chǔ)部免疫學(xué)教研室;新疆解放軍第546醫(yī)院;第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院神經(jīng)外科;第四軍醫(yī)大學(xué)基礎(chǔ)部生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室;第四軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)系生物制藥學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： HER 原核表達 基因工程菌種 穩(wěn)定性
【基金】：國家自然科學(xué)基金重點項目(81030045) 陜西省科學(xué)技術(shù)研究發(fā)展計劃社發(fā)攻關(guān)項目(2012K13-02-06)
【分類號】：R392.9
【正文快照】： 人類表皮生長因子受體2(human epidermalgrowth factor receptor-2,HER2)過表達于乳腺癌、卵巢癌、胃癌、結(jié)腸癌、前列腺癌等多種癌組織中,并在腫瘤發(fā)生及發(fā)展中發(fā)揮重要作用,因此該分子是理想的腫瘤治療靶標[1-3]。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBi

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【相似文獻】

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本文編號：711401