本文關(guān)鍵詞：重組小鼠IFN-β原核表達(dá)載體的構(gòu)建及包涵體溶解條件的篩選

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【摘要】：目的:通過重組小鼠干擾素β(IFN-β)原核表達(dá)載體的構(gòu)建及對包涵體溶解條件的篩選,建立IFN-β原核表達(dá)模型,為篩選適合的包涵體溶解條件提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:小鼠新鮮肝組織中提取DNA,傳統(tǒng)方法構(gòu)建小鼠IFN-β原核表達(dá)載體并命名為IFN-β′。SDS-PAGE檢測以傳統(tǒng)方法、pH環(huán)境、溶解液成分、干菌與溶解液比例、溶解溫度和溶解時(shí)間的改變對包涵體溶解效果的影響。結(jié)果:IFN-β′成熟蛋白鑒定結(jié)果與預(yù)測結(jié)果吻合,誘導(dǎo)表達(dá)正常。改變pH值、在溶解液中加入DTT對包涵體溶解效果無影響,包涵體經(jīng)洗滌液洗滌后亦不能被溶解液所溶解,溫度對包涵體溶解幾乎無影響,溶解液的比例由1g菌∶5mL溶解液增加為1g菌∶20mL溶解液時(shí)能溶解部分IFN-β′蛋白包涵體。結(jié)論:成功構(gòu)建重組小鼠IFN-β原核表達(dá)載體,其蛋白以包涵體形式存在,且不易被溶解,在篩選的包涵體溶解條件中僅溶解液比例為影響包涵體蛋白溶解條件。
【作者單位】： 內(nèi)蒙古民族大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： 干擾素β 原核表達(dá) 包涵體
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助課題(81060098) 吉林省科技廳科研基金資助課題(20060416)
【分類號】：R363
【正文快照】： 干擾素β(interferon-β,IFN-β)具有廣泛的抗病毒作用,對一般病毒感染有促進(jìn)機(jī)體恢復(fù)及縮短病程的作用[1-2]。IFN-β對某些癌細(xì)胞有抑制作用,可下調(diào)細(xì)胞原癌基因的轉(zhuǎn)錄水平,下調(diào)某些生長因子受體表達(dá)[3],對巨噬細(xì)胞的功能有增進(jìn)作用,并可調(diào)節(jié)T、B淋巴細(xì)胞的功能[4]。利用基

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本文編號：702372