本文關(guān)鍵詞：miR-19b轉(zhuǎn)基因小鼠的構(gòu)建及表型分析

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【摘要】：目的:構(gòu)建心肌細(xì)胞特異性過(guò)表達(dá)miR-19b的轉(zhuǎn)基因小鼠,并對(duì)其進(jìn)行表型分析。方法:先確定載體插入的酶切位點(diǎn),根據(jù)CloneEZ汶RPCR Cloning Kit重組原理設(shè)計(jì)相應(yīng)引物,以小鼠基因組為模板克隆出帶有miR-19b前體序列(pre-miR-19b)的目的片段,利用重組酶連接到帶有alpha-MHC啟動(dòng)子的載體上。將所得載體線性化后,采用顯微注射方法注射到小鼠胚胎干細(xì)胞內(nèi)。再將所得的重組胚胎干細(xì)胞移植入假孕的C57BL/6J雌鼠子宮內(nèi),在所得的子代,即Founder小鼠中采用特異的引物鑒定出轉(zhuǎn)基因小鼠,并選出相應(yīng)的品系,進(jìn)行表型分析。結(jié)果:成功構(gòu)建miR-19b轉(zhuǎn)基因小鼠,且miR-19b轉(zhuǎn)基因小鼠舒張期室間隔厚度、舒張期左室游離壁厚度以及射血分?jǐn)?shù)均有升高。結(jié)論:心肌特異性過(guò)表達(dá)miR-19b可以導(dǎo)致心臟肥大。
【作者單位】： 南京醫(yī)科大學(xué)附屬南京市婦幼保健院兒科;
【關(guān)鍵詞】： 轉(zhuǎn)基因小鼠 心臟肥大 miR-b 心血管疾病
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81070500) 江蘇省醫(yī)學(xué)重點(diǎn)人才基金項(xiàng)目(RC2011021)
【分類號(hào)】：R-332
【正文快照】： microRNAs(miRNA)是真核細(xì)胞中一種21～25個(gè)核苷酸、參與轉(zhuǎn)錄后基因調(diào)控的非編碼單鏈小分子RNA,可特異性識(shí)別靶基因mRNA的3′-非翻譯區(qū)(3′-UTR)并與之結(jié)合,引起靶基因mRNA的降解或翻譯抑制,從而對(duì)基因進(jìn)行轉(zhuǎn)錄后表達(dá)調(diào)控,調(diào)節(jié)許多重要的細(xì)胞活動(dòng)[1]。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了千余種miR

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