發(fā)布時(shí)間：2017-08-18 21:22

  本文關(guān)鍵詞：體外培養(yǎng)不同時(shí)間后凍存對(duì)臍血來(lái)源CIK細(xì)胞生物學(xué)活性的影響

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【摘要】：目的:觀察體外培養(yǎng)不同時(shí)間后凍存對(duì)人臍血來(lái)源細(xì)胞因子誘導(dǎo)殺傷(cytokine induced killer,CIK)細(xì)胞增殖、免疫表型、細(xì)胞毒活性以及細(xì)胞因子分泌的影響。方法:CIK細(xì)胞在體外培養(yǎng)6、9、12 d后凍存1個(gè)月,復(fù)蘇后培養(yǎng)至72 h,其間每隔24 h檢測(cè)細(xì)胞增殖情況,并采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)復(fù)蘇后細(xì)胞免疫表型、CCK-8法檢測(cè)復(fù)蘇后細(xì)胞對(duì)A549細(xì)胞的殺傷活性、ELISA方法檢測(cè)復(fù)蘇后CIK細(xì)胞分泌細(xì)胞因子IFN-γ和TNF-α的變化。結(jié)果:體外培養(yǎng)不同時(shí)間后凍存的CIK細(xì)胞在復(fù)蘇后仍然顯示出較好的增殖活性,其中,體外培養(yǎng)6 d后凍存組CIK細(xì)胞增殖活性明顯高于體外培養(yǎng)9 d和12 d后凍存組CIK細(xì)胞,復(fù)蘇72 h時(shí),6、9、12 d凍存組CIK細(xì)胞數(shù)分別為(35.90±1.67)×106、(18.98±2.13)×106和(11.76±2.12)×106個(gè)(P0.01)。體外培養(yǎng)6、9、12 d后凍存組CIK細(xì)胞復(fù)蘇24 h后,各凍存組CD3+CD56+、CD3+CD8+細(xì)胞比例逐漸增加,且復(fù)蘇72 h后6 d凍存組CIK細(xì)胞中CD3+CD56+和CD3+CD8+細(xì)胞比例最低。體外培養(yǎng)后凍存組CIK細(xì)胞在復(fù)蘇24 h內(nèi)對(duì)A549細(xì)胞的殺傷活性較低,但24 h后細(xì)胞毒活性有較大幅度的增加,且體外培養(yǎng)12 d后凍存組CIK細(xì)胞對(duì)A549細(xì)胞的殺傷活性高于6 d和9 d凍存組CIK細(xì)胞,如復(fù)蘇后72 h,12、6、9 d凍存組CIK細(xì)胞對(duì)A549細(xì)胞的抑瘤率分別為(0.81±0.09)%、(0.59±0.06)%、(0.42±0.08)%(P0.01)。ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示,隨著復(fù)蘇時(shí)間的延長(zhǎng),體外培養(yǎng)不同時(shí)間后凍存的CIK細(xì)胞分泌IFN-γ和TNF-α的水平也逐漸上升;復(fù)蘇72 h時(shí),體外培養(yǎng)6 d后凍存組CIK細(xì)胞分泌IFN-γ的量要高于其他組,而體外培養(yǎng)12 d后凍存組TNF-α的分泌量則明顯高于其他組。結(jié)論:體外培養(yǎng)不同時(shí)間后凍存對(duì)CIK細(xì)胞的生物學(xué)活性有一定影響,但復(fù)蘇后經(jīng)短時(shí)間培養(yǎng)后基本恢復(fù),提示CIK細(xì)胞可以在培養(yǎng)至12 d后進(jìn)行凍存。
【作者單位】： 成都清科生物科技(集團(tuán))有限公司;四川大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與法醫(yī)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 細(xì)胞因子誘導(dǎo)殺傷細(xì)胞 凍存 細(xì)胞毒活性 免疫表型
【分類(lèi)號(hào)】：R392
【正文快照】： 細(xì)胞因子誘導(dǎo)殺傷(cytokine induced killer,CIK)細(xì)胞是在體外利用多種細(xì)胞因子刺激誘導(dǎo)單個(gè)核細(xì)胞而獲取的異質(zhì)性細(xì)胞群,自1991年Schmidt-Wolf等[1]成功培養(yǎng)之后,CIK細(xì)胞以其培養(yǎng)簡(jiǎn)單、擴(kuò)增速度快、殺瘤活性高、使用安全等特點(diǎn),越來(lái)越廣泛地應(yīng)用于腫瘤的生物治療中[2-5]。在

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本文編號(hào)：696851