本文關鍵詞：體外培養(yǎng)不同時間后凍存對臍血來源CIK細胞生物學活性的影響

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【摘要】：目的:觀察體外培養(yǎng)不同時間后凍存對人臍血來源細胞因子誘導殺傷(cytokine induced killer,CIK)細胞增殖、免疫表型、細胞毒活性以及細胞因子分泌的影響。方法:CIK細胞在體外培養(yǎng)6、9、12 d后凍存1個月,復蘇后培養(yǎng)至72 h,其間每隔24 h檢測細胞增殖情況,并采用流式細胞術檢測復蘇后細胞免疫表型、CCK-8法檢測復蘇后細胞對A549細胞的殺傷活性、ELISA方法檢測復蘇后CIK細胞分泌細胞因子IFN-γ和TNF-α的變化。結果:體外培養(yǎng)不同時間后凍存的CIK細胞在復蘇后仍然顯示出較好的增殖活性,其中,體外培養(yǎng)6 d后凍存組CIK細胞增殖活性明顯高于體外培養(yǎng)9 d和12 d后凍存組CIK細胞,復蘇72 h時,6、9、12 d凍存組CIK細胞數(shù)分別為(35.90±1.67)×106、(18.98±2.13)×106和(11.76±2.12)×106個(P0.01)。體外培養(yǎng)6、9、12 d后凍存組CIK細胞復蘇24 h后,各凍存組CD3+CD56+、CD3+CD8+細胞比例逐漸增加,且復蘇72 h后6 d凍存組CIK細胞中CD3+CD56+和CD3+CD8+細胞比例最低。體外培養(yǎng)后凍存組CIK細胞在復蘇24 h內對A549細胞的殺傷活性較低,但24 h后細胞毒活性有較大幅度的增加,且體外培養(yǎng)12 d后凍存組CIK細胞對A549細胞的殺傷活性高于6 d和9 d凍存組CIK細胞,如復蘇后72 h,12、6、9 d凍存組CIK細胞對A549細胞的抑瘤率分別為(0.81±0.09)%、(0.59±0.06)%、(0.42±0.08)%(P0.01)。ELISA檢測結果顯示,隨著復蘇時間的延長,體外培養(yǎng)不同時間后凍存的CIK細胞分泌IFN-γ和TNF-α的水平也逐漸上升;復蘇72 h時,體外培養(yǎng)6 d后凍存組CIK細胞分泌IFN-γ的量要高于其他組,而體外培養(yǎng)12 d后凍存組TNF-α的分泌量則明顯高于其他組。結論:體外培養(yǎng)不同時間后凍存對CIK細胞的生物學活性有一定影響,但復蘇后經(jīng)短時間培養(yǎng)后基本恢復,提示CIK細胞可以在培養(yǎng)至12 d后進行凍存。
【作者單位】： 成都清科生物科技(集團)有限公司;四川大學基礎醫(yī)學與法醫(yī)學院;
【關鍵詞】： 細胞因子誘導殺傷細胞 凍存 細胞毒活性 免疫表型
【分類號】：R392
【正文快照】： 細胞因子誘導殺傷(cytokine induced killer,CIK)細胞是在體外利用多種細胞因子刺激誘導單個核細胞而獲取的異質性細胞群,自1991年Schmidt-Wolf等[1]成功培養(yǎng)之后,CIK細胞以其培養(yǎng)簡單、擴增速度快、殺瘤活性高、使用安全等特點,越來越廣泛地應用于腫瘤的生物治療中[2-5]。在

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