本文關(guān)鍵詞：A20人工鋅指轉(zhuǎn)錄因子真核載體的構(gòu)建及其對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)的影響

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【摘要】：目的觀察A20基因的人工鋅指轉(zhuǎn)錄因子(zinc finger-artificial transcription factor,ZF-ATF)對(duì)內(nèi)源性A20基因及內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)的影響。方法根據(jù)人A20基因的序列,設(shè)計(jì)出其ZF-ATF,合成靶序列Oligo DNA,退火形成雙鏈DNA,與通過BamHⅠ和KpnⅠ酶切后的載體連接產(chǎn)生ZF-ATF真核載體,質(zhì)粒轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)菌DH5α,篩選陽性克隆,提取質(zhì)粒,限制性內(nèi)切酶酶切鑒定,鑒定陽性克隆進(jìn)行測(cè)序。質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical veinendothelial cell,HUVEC),通過Western blot檢測(cè)A20蛋白的表達(dá),用脂多糖(LPS)誘導(dǎo)HUVEC細(xì)胞產(chǎn)生炎癥反應(yīng),利用Western blot檢測(cè)NF-κB p65的表達(dá)情況,利用ELISA檢測(cè)TNF-α、IL-6、IL-8等的水平。結(jié)果限制性內(nèi)切酶酶切鑒定與DNA測(cè)序證實(shí)合成的含ATF的真核載體寡核苷酸鏈插入正確,Western blot證實(shí)轉(zhuǎn)染HUVEC后A20蛋白表達(dá)顯著增加。ELISA法檢測(cè)結(jié)果表明,在LPS刺激后,空載體組及空白組細(xì)胞因子IL-8、IL-6、TNF-α表達(dá)均明顯上調(diào),而ZF-ATF轉(zhuǎn)染組沒有明顯上調(diào),與空載體組及空白組比較,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05,P0.01);Western blot證實(shí)在LPS刺激后ZF-ATF轉(zhuǎn)染組NF-κB p65的表達(dá)(19.8±4.5)較空載體組(90.2±5.9)及空白組(96.3±3.3)顯著下調(diào)(P0.01)。結(jié)論成功構(gòu)建人工鋅指轉(zhuǎn)錄因子真核表達(dá)載體,且能夠啟動(dòng)內(nèi)源性A20的穩(wěn)定表達(dá),并發(fā)揮其抗炎等作用。
【作者單位】： 第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科;
【關(guān)鍵詞】： A 人工轉(zhuǎn)錄因子 抗炎作用
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81000671) 重慶市自然科學(xué)基金(CSTC2010BB5190)~~
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： 缺血性腦血管病是常見病、多發(fā)病,致殘率與病死率均高。微創(chuàng)的血管內(nèi)介入治療應(yīng)用于缺血性腦血管病的二級(jí)預(yù)防,顯著降低了卒中的發(fā)生率。但是球囊擴(kuò)張、支架植入等經(jīng)皮血管成形術(shù)(percutaneous trans-luminal angioplasty,PTA)對(duì)局部血管造成的損傷以及過度修復(fù)反應(yīng)———再

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：672568