本文關(guān)鍵詞：腸上皮細(xì)胞來源的整合素αVβ6對(duì)腸道樹突狀細(xì)胞TGF-β1表達(dá)的影響

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【摘要】：背景和目的 在過去的數(shù)十年中,食物過敏的患病率在全世界顯著增加,最近的研究報(bào)道,4%至8%的兒童和3%至4%的成人曾發(fā)生過食物過敏,而且食物過敏的發(fā)病率仍在增長(zhǎng)。過敏性疾病影響著人類健康和社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展,目前對(duì)于過敏性疾病的治療及預(yù)防方法仍然不能令人滿意的,而且其發(fā)病機(jī)制還有待進(jìn)一步了解。 食物過敏是一種免疫反應(yīng),腸道口服耐受受損及Th2細(xì)胞的極化是食物過敏的主要發(fā)病機(jī)制。研究發(fā)現(xiàn)口服耐受是多種機(jī)制共同作用的結(jié)果：包括T細(xì)胞克隆無能和缺失,以及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)產(chǎn)生特異性的抗原。耐受性樹突狀細(xì)胞(tolerance dendritic cell, TolDC)在啟動(dòng)免疫反應(yīng)和維持免疫耐受性中發(fā)揮了關(guān)鍵作用,其通過誘導(dǎo)Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)來抑制免疫反應(yīng)從而高表達(dá)IL-10、TGF-β、視黃酸、吲哚-2,3-雙加氧酶與維生素D,低表達(dá)MHC II類(MHCII)和共刺激分子。TolDC在Treg產(chǎn)生和口服耐受中起關(guān)鍵作用。腸道是表面積最大的免疫器官,而腸上皮細(xì)胞(IEC)處于機(jī)體與外界抗原接觸的第一線。其表面表達(dá)的一系列細(xì)胞分子,通過限制腸腔細(xì)菌和食物過敏原的侵入,在維護(hù)腸道內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定中起著至關(guān)重要的作用。IEC可以促使TolDC的分化,而且與身體其他器官相比,腸道固有層擁有更多的TolDC. 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β (TGF-p)作為二聚體多肽生長(zhǎng)因子家族的成員,參與細(xì)胞功能調(diào)節(jié),增殖,分化和遷移。在TGF-β已知的三個(gè)異構(gòu)體(TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3)中,TGF-β1主要在免疫系統(tǒng)中表達(dá),TGF-β1主要與其受體結(jié)合來調(diào)節(jié)免疫功能；以非活化的狀態(tài)存在,被激活后才能發(fā)揮其潛在的復(fù)雜的生物學(xué)作用。有研究顯示整合素αVβ6(integrinaVβ6)在TGF-β1的活化中扮演重要的作用。αVβ6是由α和β亞基組成的細(xì)胞粘附蛋白,其在健康成人的上皮細(xì)胞中不表達(dá),但在炎癥,傷口修復(fù)和癌癥中表達(dá)升高。aVβ6通過與非活化TGF-β羧基末端的氨基酸序列結(jié)合,促使TGF-β的活化。卵清蛋白(ovalbumin,O VA)因具有抗原性,常常被用于食物抗原模型的研究。 我們既往研究中,通過給予小鼠OVA和佐劑建立了經(jīng)典的小鼠腸道OVA過敏模型。另有研究顯示,通過灌胃只給予OVA則能夠誘導(dǎo)建立小鼠腸道食物抗原耐受模型,其機(jī)制有待進(jìn)一步研究。我們既往通過體外細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)研究顯示,腸道上皮細(xì)胞來源外泌體中含有整合素αVβ6及食物抗原,能夠增加骨髓來源樹突狀細(xì)胞中TGF-β的表達(dá),并使之轉(zhuǎn)變?yōu)門olDC,但整合素αVβ6在腸道TolDC產(chǎn)生中是否具有重要作用仍有待進(jìn)一步研究。本研究中,我們將通過體內(nèi)試驗(yàn),首先建立小鼠OVA耐受模型,并進(jìn)一步通過抗整合素αVβ6干預(yù),評(píng)價(jià)腸道黏膜TolDC的產(chǎn)生�？功罺β6抗體能夠阻斷OVA耐受小鼠腸道中TolDC的產(chǎn)生。腸上皮來源整合素αVβ6能夠增加DC中TGF-β1的表達(dá),并使其轉(zhuǎn)變?yōu)門olDC,從而在腸道免疫耐受中起重要作用,本研究為食物過敏性疾病發(fā)病機(jī)制的研究提供了新的理論依據(jù)。 方法 無菌Balb/c雄性/雌性小鼠30只,隨機(jī)分為3組：空白對(duì)照組、OVA組、OVA+抗αVβ6抗體組。OVA組OVA灌胃(空白對(duì)照組生理鹽水灌胃為對(duì)照),OVA+抗αVβ6抗體組腹腔注射抗αVβ6抗體,30min后OVA灌胃,方法同OVA組。取空腸分離固有層單核細(xì)胞(LPMC),免疫磁珠分離DC細(xì)胞。流式細(xì)胞儀測(cè)定TolDC(CD11c+TGF-β1+)的比率變化。免疫熒光雙染法(IF)檢測(cè)空腸CDllc+與TGF-β1+分布情況。Western-bolt法測(cè)定TGF-β1蛋白水平變化。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析采用SPSS17.0, p0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 結(jié)果 1.分離各組小鼠腸道LPMC,免疫磁珠分選腸道DC細(xì)胞,經(jīng)抗CD11c抗體及TGF-β1抗體染色,流式細(xì)胞儀分析：與空白對(duì)照組相比,OVA組腸道LPMC中的TGF-β1+百分率明顯增加(p0.05)；而OVA+抗αVβ6抗體組TGF-β1+百分率明顯降低(p0.05)。與OVA組相比,OVA+抗αVβ6抗體組TGF-β1+百分率明顯降低(p0.05)。 2.OVA灌胃后,OVA組小鼠空腸組織中TolDC細(xì)胞分布計(jì)數(shù)為(13.0±1.760),較空白對(duì)照組(4.9±1.66)顯著增加(p0.05),該組中CD11c+DC細(xì)胞分布計(jì)數(shù)為(5.0±1.83),較空白對(duì)照組(8.1±±1.91)顯著減少(p0.05)；OVA+抗αVβ6抗體組中ToIDC細(xì)胞分布計(jì)數(shù)為(3.2±1.37),較空白對(duì)照組(4.9-±1.66)無明顯變化(p0.05),該組中CD11c+DC細(xì)胞計(jì)數(shù)為(11.0±2.16),較空白對(duì)照組(8.1±±1.91)無明顯變化(p0.05)。 3.與空白對(duì)照組相比(0.129+0.069),OVA組(0.236±0.049)TGF-β1表達(dá)顯著增高(p0.05)；OVA+抗αVβ6抗體組(0.1744±0.075)表達(dá)顯著降低(p0.05)。與OVA組相比,OVA+抗αVβ6抗體組(0.1744±0.075)TGF-β1表達(dá)顯著降低(P0.05) 結(jié)論 1.腸道粘膜固有層單核細(xì)胞(LPMC)來源CDllc陽性細(xì)胞經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)后發(fā)現(xiàn),CDllc+和TGF-β1+的表達(dá)增高；抗αVβ6抗體拮抗后,TGF-β1+不能活化,TGF-β1+表達(dá)降低。 2.OVA刺激后,空腸TGF-β1+細(xì)胞分布密度增加,TolDC細(xì)胞增多；抗αVβ6抗體拮抗后,TolDC細(xì)胞密度降低。OVA刺激后,TGF-β1的蛋白表達(dá)量上升；抗αVβ6抗體拮抗后,TGF-β1的蛋白表達(dá)量下降。提示TGF-β1的改變受到αVβ6的調(diào)節(jié)。 3.腸上皮來源整合素αVβ6能夠增加DC中TGF-β1的表達(dá),并使其轉(zhuǎn)變?yōu)門olDC,從而在腸道免疫耐受中起重要作用。
【關(guān)鍵詞】：食物過敏 αVβ6 TGF-β1 樹突狀細(xì)胞 CD11c
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R363
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-12
• 前言12-15
• 材料與方法15-26
• 結(jié)果26-29
• 討論29-35
• 結(jié)論35-36
• 附圖與表36-41
• 參考文獻(xiàn)41-45
• 綜述45-60
• 參考文獻(xiàn)55-60
• 中英文縮略詞對(duì)照表60-61
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷、在校期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文61-62
• 致謝62

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 孔磊;孫景武;張彩虹;;整合素αvβ6和MMP-9在胃癌中表達(dá)及其與胃癌病理生物學(xué)特征的關(guān)系[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2011年01期

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本文編號(hào)：670673