本文關(guān)鍵詞：誘導人臍帶MSCs分化為胰島樣細胞團的促成熟方案及機制

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【摘要】：目的:通過各種生物化學制劑的不同組合在體外誘導人臍帶間充質(zhì)干細胞(hUC-MSCs)向胰島樣細胞團(ILCs)分化,篩選出能表達激素原轉(zhuǎn)化酶(PC)1和PC2的促成熟方案。方法:用膠原酶Ⅱ消化、過濾離心和不完全消化傳代的方法從人的完整臍帶中分離和純化hUC-MSCs,流式細胞術(shù)、RT-PCR和免疫細胞熒光技術(shù)檢測其干細胞標志物。選用A、B、C 3種方案誘導hUC-MSCs向ILCs分化:方案A為含10μg/L堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)、10μg/L表皮生長因子(EGF)、10 mg/L銀杏提取液(GBE)及2%胎牛血清(FCS)的高糖培養(yǎng)基IM-DM;在方案A基礎(chǔ)上加入10μg/L尼克酰胺為方案B;在方案B基礎(chǔ)上加入10μg/L肝細胞生長因子(HGF)為方案C。在hUC-MSCs誘導前后,通過倒置顯微鏡觀察其形態(tài)變化,采用RT-PCR、qPCR和Western blotting檢測胰島相關(guān)mRNA和蛋白,特別是PC1和PC2的表達情況。結(jié)果:(1)細胞形態(tài)、表面相關(guān)抗原、干細胞特異基因的表達等情況表明hUC-MSCs可以從人臍帶中被成功地分離和純化;hUC-MSCs普遍表達nestin,輕微表達Isl1。(2)RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn)方案A誘導的ILCs有Glut-2和MafA mRNA表達,方案B誘導的ILCs有Glut-2、MafA、Nkx6.1和PC2mRNA表達,方案C誘導的ILCs有Glut-2、MafA、Nkx6.1、PC2、Ngn3、Pdx1、PC1和胰島素mRNA表達,提示A、B和C3種方案誘導的細胞有逐漸成熟的趨勢。qPCR檢測也證實了PC1 mRNA僅在方案C中有表達,PC2 mRNA在方案B和方案C中均有表達,但方案C中PC2 mRNA的表達量顯著高于方案B(P0.01);Western blotting結(jié)果也表明PC1蛋白只在方案C中有表達;PC2酶原(ProPC2)與PC2在方案B和方案C中都有表達,且它們在方案C中的表達量均顯著高于方案B(P0.01)。結(jié)論:(1)hUC-MSCs具有向胰島祖細胞或胰島細胞分化的潛能;(2)方案C中尼克酰胺和HGF可促進hUC-MSCs向ILCs分化,使ILCs表達PC1并上調(diào)PC2;相對于方案A和B,方案C是一種促成熟方案。
【作者單位】： 暨南大學醫(yī)學院生理學系;
【關(guān)鍵詞】： 臍帶 間充質(zhì)干細胞 激素原轉(zhuǎn)化酶 胰島樣細胞團
【基金】：廣東省醫(yī)學科研基金(No.A2012325) 中央高校基本科研業(yè)務(wù)費專項資金(No.21612427) 廣東省科技計劃(No.2012B060300020) 暨南大學國家級大學生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓練計劃項目(No.1210559028)
【分類號】：R329
【正文快照】： 間充質(zhì)干細胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是來源于中胚層的一類多功能干細胞,可以分化成具有外胚層、中胚層或內(nèi)胚層特征的細胞[1-2]。大量研究表明人臍帶間充質(zhì)干細胞(mesenchymal stemcells derived from human umbilical cord,hUC-MSCs)能分化為成脂肪細胞、軟骨細胞、

【參考文獻】

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1 李杏肖;李曉紅;林秋雄;肖定璋;劉曉穎;單志新;朱杰寧;麥麗萍;夏慧蘇;余細勇;;轉(zhuǎn)染isl1基因促進骨髓間充質(zhì)干細胞向心肌樣細胞分化[J];中國病理生理雜志;2012年01期

2 王舒陽;韓瑞;張廣宇;王翠琴;彭越;魯晶晶;彭濤;賈延R，

本文編號：665782