本文關(guān)鍵詞：誘導(dǎo)人臍帶MSCs分化為胰島樣細(xì)胞團(tuán)的促成熟方案及機(jī)制

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【摘要】：目的:通過各種生物化學(xué)制劑的不同組合在體外誘導(dǎo)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(hUC-MSCs)向胰島樣細(xì)胞團(tuán)(ILCs)分化,篩選出能表達(dá)激素原轉(zhuǎn)化酶(PC)1和PC2的促成熟方案。方法:用膠原酶Ⅱ消化、過濾離心和不完全消化傳代的方法從人的完整臍帶中分離和純化hUC-MSCs,流式細(xì)胞術(shù)、RT-PCR和免疫細(xì)胞熒光技術(shù)檢測其干細(xì)胞標(biāo)志物。選用A、B、C 3種方案誘導(dǎo)hUC-MSCs向ILCs分化:方案A為含10μg/L堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)、10μg/L表皮生長因子(EGF)、10 mg/L銀杏提取液(GBE)及2%胎牛血清(FCS)的高糖培養(yǎng)基IM-DM;在方案A基礎(chǔ)上加入10μg/L尼克酰胺為方案B;在方案B基礎(chǔ)上加入10μg/L肝細(xì)胞生長因子(HGF)為方案C。在hUC-MSCs誘導(dǎo)前后,通過倒置顯微鏡觀察其形態(tài)變化,采用RT-PCR、qPCR和Western blotting檢測胰島相關(guān)mRNA和蛋白,特別是PC1和PC2的表達(dá)情況。結(jié)果:(1)細(xì)胞形態(tài)、表面相關(guān)抗原、干細(xì)胞特異基因的表達(dá)等情況表明hUC-MSCs可以從人臍帶中被成功地分離和純化;hUC-MSCs普遍表達(dá)nestin,輕微表達(dá)Isl1。(2)RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn)方案A誘導(dǎo)的ILCs有Glut-2和MafA mRNA表達(dá),方案B誘導(dǎo)的ILCs有Glut-2、MafA、Nkx6.1和PC2mRNA表達(dá),方案C誘導(dǎo)的ILCs有Glut-2、MafA、Nkx6.1、PC2、Ngn3、Pdx1、PC1和胰島素mRNA表達(dá),提示A、B和C3種方案誘導(dǎo)的細(xì)胞有逐漸成熟的趨勢。qPCR檢測也證實了PC1 mRNA僅在方案C中有表達(dá),PC2 mRNA在方案B和方案C中均有表達(dá),但方案C中PC2 mRNA的表達(dá)量顯著高于方案B(P0.01);Western blotting結(jié)果也表明PC1蛋白只在方案C中有表達(dá);PC2酶原(ProPC2)與PC2在方案B和方案C中都有表達(dá),且它們在方案C中的表達(dá)量均顯著高于方案B(P0.01)。結(jié)論:(1)hUC-MSCs具有向胰島祖細(xì)胞或胰島細(xì)胞分化的潛能;(2)方案C中尼克酰胺和HGF可促進(jìn)hUC-MSCs向ILCs分化,使ILCs表達(dá)PC1并上調(diào)PC2;相對于方案A和B,方案C是一種促成熟方案。
【作者單位】： 暨南大學(xué)醫(yī)學(xué)院生理學(xué)系;
【關(guān)鍵詞】： 臍帶 間充質(zhì)干細(xì)胞 激素原轉(zhuǎn)化酶 胰島樣細(xì)胞團(tuán)
【基金】：廣東省醫(yī)學(xué)科研基金(No.A2012325) 中央高�；究蒲袠I(yè)務(wù)費(fèi)專項資金(No.21612427) 廣東省科技計劃(No.2012B060300020) 暨南大學(xué)國家級大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計劃項目(No.1210559028)
【分類號】：R329
【正文快照】： 間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是來源于中胚層的一類多功能干細(xì)胞,可以分化成具有外胚層、中胚層或內(nèi)胚層特征的細(xì)胞[1-2]。大量研究表明人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stemcells derived from human umbilical cord,hUC-MSCs)能分化為成脂肪細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、

【參考文獻(xiàn)】

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1 李杏肖;李曉紅;林秋雄;肖定璋;劉曉穎;單志新;朱杰寧;麥麗萍;夏慧蘇;余細(xì)勇;;轉(zhuǎn)染isl1基因促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌樣細(xì)胞分化[J];中國病理生理雜志;2012年01期

2 王舒陽;韓瑞;張廣宇;王翠琴;彭越;魯晶晶;彭濤;賈延R，

本文編號：665782