本文關鍵詞：人HVEM-Fc融合蛋白的制備及其生物學特性

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【摘要】：為建立CHO/HVEM-Fc基因轉染細胞株,使之能穩(wěn)定分泌HVEM-Fc融合蛋白,采用常規(guī)PCR法分別從本單位已構建的重組載體pGEZ-Term/B7-H1-Fc和pIRES2-EGFP/HVEM上擴增人IgG1(Fc)恒定區(qū)和人HVEM胞外段編碼基因,XhoⅠ和Bam HI雙酶切人IgG1(Fc)恒定區(qū)及真核表達載體pIRES2-EGFP,將兩種酶切的目的產物連接為pIRES2-EGFP/Fc,同時將獲得的人HVEM胞外段基因片段經XhoⅠ和NheⅠ酶切后插入上述pIRES2-EGFP/Fc構建成pIRES2-EGFP/HVEM-Fc重組載體,通過脂質體轉染倉鼠卵巢癌CHO細胞,培養(yǎng)基中添加G418長期篩選并將分泌目的蛋白的基因轉染細胞株亞克隆化。流式細胞術檢測HVEM-Fc融合蛋白的表達,收集含融合蛋白的基因轉染細胞培養(yǎng)上清,Protein G親和層析柱對其進行純化,Western blot定性分析。MTT檢測HVEM-Fc融合蛋白體外對抗人CD3單抗聯(lián)合基因轉染細胞L929/LIGHT刺激的T淋巴細胞增殖的影響。結果表明,基因轉染細胞CHO/HVEM-Fc分泌的HVEM-Fc融合蛋白能與L929/LIGHT細胞有效結合,純化后的蛋白經Western blot鑒定出現特異性清晰條帶,并且HVEM-Fc融合蛋白對L929/LIGHT協(xié)同刺激的T細胞體外增殖具有抑制作用。
【作者單位】： 蘇州大學附屬第一醫(yī)院江蘇省臨床免疫研究所;蘇州大學基礎醫(yī)學與生物科學學院;蘇州大學醫(yī)學生物技術研究所;
【關鍵詞】： 單純皰疹病毒侵入介質(HVEM) 融合蛋白 共刺激分子 T細胞
【基金】：國家自然科學基金重點項目(30930085);國家自然科學基金(30600548) 蘇州市科技發(fā)展計劃(SYS201101) 江蘇省青藍工程人才基金
【分類號】：R392.12
【正文快照】： 適度、有效免疫應答的啟動、發(fā)生、發(fā)展取決于正性和負性共刺激分子間的平衡[l，’」。作為TNF超家族成員之一的LIGHT與其受體分子HVEM結合可促進T細胞活化與增值〔，一5〕，而此正性信號的過度表達可誘發(fā)自身免疫疾病和移植時GVHD的發(fā)生，應用LIGHT抗體或其受體的融合蛋白阻

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本文編號：553809