沙眼衣原體pORF8質(zhì)粒蛋白的表達(dá)及其單克隆抗體的制備與鑒定
發(fā)布時(shí)間:2017-07-07 23:16
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【摘要】:目的表達(dá)沙眼衣原體pORF8質(zhì)粒蛋白,制備其單克隆抗體(mAb),并鑒定mAbs的生物學(xué)特征。方法克隆表達(dá)pORF8融合蛋白并免疫小鼠,制備致敏脾淋巴細(xì)胞。取脾淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞SP2/0融合,建立雜交瘤細(xì)胞株;間接免疫熒光試驗(yàn)(IFA)篩選穩(wěn)定分泌抗pORF8蛋白mAbs的陽性細(xì)胞株并鑒定mAbs類型;ELISA法測(cè)定mAbs效價(jià);IFA、Western blot鑒定mAbs特異性。結(jié)果篩選出3株穩(wěn)定分泌特異性抗pORF8mAb的雜交瘤細(xì)胞株,分別為12C7、5C2、12F8,抗體類型分別為IgM、IgG3、IgG3;雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清的抗體效價(jià)分別為1,
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