本文關(guān)鍵詞：封閉N-cadherin解整合素金屬蛋白酶水解位點(diǎn)的單鏈抗體的制備及鑒定，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的制備封閉神經(jīng)型鈣黏素(N-cadherin)解整合素金屬蛋白酶水解位點(diǎn)(ADAM)的單鏈抗體(scFv),并進(jìn)行鑒定。方法首先利用RT-PCR技術(shù)從分泌抗N-cadherin的ADAM水解位點(diǎn)單克隆抗體(mAb)細(xì)胞株中擴(kuò)增出重鏈(V_H)和輕鏈(V_L)可變區(qū)基因片段,然后通過重疊延伸PCR法(SOE-PCR),構(gòu)建成scFv基因片段。再將其克隆入原核表達(dá)載體pET-28a中,在大腸桿菌中誘導(dǎo)表達(dá),通過鎳柱純化和復(fù)性后,用SDS-PAGE、ELISA和Western blot法等測定重組蛋白的生物學(xué)活性。結(jié)果PER、酶切和測序表明scFv片段長744 bp,編碼248個(gè)氨基酸。scFv基因表達(dá)載體轉(zhuǎn)化E.coli BL21(DE3),經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)出相對分子質(zhì)量(M_r)約29 000的目的蛋白,主要為包涵體形式,經(jīng)變性,純化和復(fù)性后,獲得純度達(dá)90%以上的scFv蛋白,ELISA和Western blot法檢測表明可溶性scFv可以與N-cadherin的ADAM水解位點(diǎn)序列多抗原短肽和全長N-cadherin結(jié)合。結(jié)論成功構(gòu)建并表達(dá)封閉N-cadherin的ADAM加工位點(diǎn)單鏈抗體。
【作者單位】： 武漢大學(xué)人民醫(yī)院兒科;武漢市醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所;
【關(guān)鍵詞】： ADAM N-cadherin 單鏈抗體 基因表達(dá)
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81000094) 武漢大學(xué)自主青年基金(4101016)
【分類號】：R392.11
【正文快照】： 神經(jīng)型鈣黏素(neural cadherin,N-cadherin)是調(diào)節(jié)細(xì)胞與細(xì)胞之間,細(xì)胞與基質(zhì)之間黏附反應(yīng)的重要媒介,對維持組織結(jié)構(gòu)形態(tài)起重要作用[l_21。N-cadherin與連環(huán)蛋白(catenins)形成N型鈣黏蛋白/ 連環(huán)蛋白復(fù)合體(以下簡稱鈣-連復(fù)合體),可使N- cadherin集中定位于細(xì)胞與細(xì)胞間的接

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本文編號：483477