發(fā)布時(shí)間：2024-10-03 00:56

　　目的:比較小鼠在熱中性溫度30?C,室溫23?C,低溫6?C環(huán)境中,肝臟脂滴及線粒體蛋白的變化,探討小鼠肝臟在不同環(huán)境溫度下糖脂代謝的變化及其機(jī)制。方法:將小鼠分別在三個(gè)溫度下飼養(yǎng)1個(gè)月,分離純化肝臟的脂滴,線粒體,進(jìn)行比較蛋白組學(xué)分析,以及生化實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,結(jié)合生物信息學(xué)方法,分析小鼠肝臟在不同環(huán)境溫度下糖脂代謝的變化。1.小鼠處理及肝臟變化分析:選取10周齡的C57BL/6雄鼠18只,隨機(jī)分為3組,每組6只,分別飼養(yǎng)于熱中性溫度30?C,室溫23?C,低溫6?C,三個(gè)溫度的培養(yǎng)箱中,每籠1只,喂食普通飼料,飼養(yǎng)1個(gè)月。1個(gè)月后斷頸處死,測(cè)定肝臟重量、體重、糖原、甘油三酯。2.小鼠肝臟脂滴和線粒體的純化:分別用蔗糖密度梯度離心法和Percoll密度梯度離心法分離純化小鼠肝臟脂滴(lipid droplets,LDs)及線粒體(mitochondria,MT)。3.純化的脂滴和線粒體的質(zhì)量評(píng)估:將純化的脂滴、線粒體染色后進(jìn)行形態(tài)學(xué)分析;對(duì)其蛋白進(jìn)行電泳分離后進(jìn)行銀染分析;以及通過蛋白質(zhì)免疫印跡方法,進(jìn)行不同細(xì)胞組分標(biāo)志蛋白的富集分析。4.脂滴及線粒體蛋白比較蛋白組學(xué)研究:利用6標(biāo)串聯(lián)質(zhì)譜標(biāo)簽...

【文章頁數(shù)】：94 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖2熒光共聚焦，銀染，免疫印跡，TLC法分析純化的脂滴和線粒體A.用蔗糖密度梯度離心法和Percoll密度梯度離心法分離的脂滴和線粒體

圖2熒光共聚焦，銀染，免疫印跡，TLC法分析純化的脂滴和線粒體A.用蔗糖密度梯度離心法和Percoll密度梯度離心法分離的脂滴和線粒體。B.用熒光共聚焦顯微鏡分析LipidTOXRed染色的脂滴，紅色球狀的為脂滴，標(biāo)尺為5μm。C.用熒光共聚焦顯微鏡分析....

圖3三個(gè)不同溫度處理的小鼠肝臟脂滴和線粒體蛋白質(zhì)譜分析

-54-圖3三個(gè)不同溫度處理的小鼠肝臟脂滴和線粒體蛋白質(zhì)譜分析A．脂滴和線粒體樣品標(biāo)記及蛋白質(zhì)譜分析流程圖。B.按照兩個(gè)溫度蛋白之比（Ratio）大于1.2或者小于0.833的標(biāo)準(zhǔn)去篩選三個(gè)溫度線粒體表達(dá)差異明顯的蛋白（P0.1）。6個(gè)模式圖代表T6/T23,....

圖1脂滴的結(jié)構(gòu)示意圖

3脂滴與脂質(zhì)代謝脂滴是一個(gè)由表面有蛋白的單層磷脂膜包被中性脂的多功能細(xì)胞器（圖1），存在于從細(xì)菌到人類幾乎所有的細(xì)胞中[17]。脂滴最早于1674年被列文虎克用顯微鏡在牛奶中發(fā)現(xiàn)。關(guān)于脂滴的形成有很多假說，現(xiàn)在最普遍接受的是脂滴來源于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，因?yàn)榕c中性脂合成

圖2線粒體的結(jié)構(gòu)示意圖

圖2線粒體的結(jié)構(gòu)示意圖，包括線粒體外膜和內(nèi)膜。內(nèi)膜向內(nèi)凸起形成嵴為膜間隙，內(nèi)膜里面的區(qū)域?yàn)榫�粒體基質(zhì)。引自/micro.magnet.fsu.edu/cells/mitochondria/mitochondr保守的SLC25線粒體載體蛋白，但是對(duì)于丙PC蛋白[36]。線粒....

本文編號(hào)：4006566