目的獲得高效價(jià)A型肉毒毒素(BoNT/A)表位多肽單克隆抗體。方法利用DNASTAR分析軟件,結(jié)合Expasy網(wǎng)絡(luò)服務(wù)器,綜合參考多參數(shù)預(yù)測B細(xì)胞抗原表位;以多肽作為抗原制備BoNT/A Hc表位多肽單克隆抗體,并進(jìn)行效價(jià)鑒定。結(jié)果以合成多肽(P1&P2)分別免疫Balb/c小鼠,獲得兩株單克隆抗體,經(jīng)鑒定分別是IgG和IgM,效價(jià)為10-5¹0-6;檢測抗體結(jié)果顯示,純度較高,特異性好。結(jié)論本研究制備出了特異性好、效價(jià)較高的A型肉毒毒素單克隆抗體,為獲得抗A型肉毒毒素的快速現(xiàn)場檢測提供技術(shù)支持。

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圖11065－1296aa的DNASTAＲ分析結(jié)果

孔與陰性對照孔A450值比值＞2判為陽性。2結(jié)果2．1多參數(shù)結(jié)果本研究采用DNASTAＲ分析軟件，結(jié)合國內(nèi)外研究結(jié)果，根據(jù)表位預(yù)測原則:抗原性＞0，表面可及性＞1，親水性＞0，具有柔韌性及β轉(zhuǎn)角等多參數(shù)綜合考慮，選取BoNT/AHC段1065－1296aa(3550－4248bp....

圖2網(wǎng)絡(luò)服務(wù)器預(yù)測結(jié)果

格為0．5mg/支。注:A:Averageflexibility方法;B:Hphob．/Hopp＆Hoods方法;C:Beta－sheet/Chou＆fasman方法;D:Beta－turn/Chou＆fasman方法;橫坐標(biāo):位置;縱坐標(biāo):分值。圖2網(wǎng)絡(luò)服務(wù)器預(yù)測結(jié)果2．4Cn....

圖3P1，P2表位預(yù)測結(jié)果

格為0．5mg/支。注:A:Averageflexibility方法;B:Hphob．/Hopp＆Hoods方法;C:Beta－sheet/Chou＆fasman方法;D:Beta－turn/Chou＆fasman方法;橫坐標(biāo):位置;縱坐標(biāo):分值。圖2網(wǎng)絡(luò)服務(wù)器預(yù)測結(jié)果2．4Cn....

圖4兩株單抗效價(jià)2．7單抗純度鑒定本試驗(yàn)采用硫酸銨法純化腹水單抗，純化回收率2C12比1D4高，可能因?yàn)榧兓?D4

格為0．5mg/支。注:A:Averageflexibility方法;B:Hphob．/Hopp＆Hoods方法;C:Beta－sheet/Chou＆fasman方法;D:Beta－turn/Chou＆fasman方法;橫坐標(biāo):位置;縱坐標(biāo):分值。圖2網(wǎng)絡(luò)服務(wù)器預(yù)測結(jié)果2．4Cn....

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