目的探究慢病毒介導shRNA質(zhì)粒TRPV2和TRPV4基因雙沉默模式在大鼠脊柱側(cè)彎模型椎間盤退變中的作用。方法本研究采用經(jīng)典的雙足大鼠脊柱側(cè)彎模型構(gòu)建的方法。根據(jù)siRNA干擾原理,構(gòu)建shRNA-TRPV2和shRNA-TRPV4干擾載體,根據(jù)實驗目的將SD大鼠分成4組,即模型組,shRNA-TRPV2組,shRNA-TRPV4組和雙基因沉默組。利用X射線對上述動物模型進行攝片,利用Masson染色檢測成骨組織,利用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色檢測破骨細胞活性,利用RT-PCR檢測BMP,BGP和ALP的mRNA表達水平。結(jié)果 shRNA-TRPV2的慢病毒轉(zhuǎn)染效率較高,為(92.3±2.7)%,shRNA-TRPV4的慢病毒轉(zhuǎn)染效率較高,為(91.5±3.3)%,影像攝片結(jié)果顯示,雙基因沉默組大鼠模型Cobb角度相較于模型組具有明顯改善(P<0.05)。Masson染色結(jié)果顯示,雙基因沉默組大鼠模型新生成骨組織明顯多于模型組(P<0.05)。TRAP染色結(jié)果顯示,雙基因沉默組大鼠模型破骨細胞活性及數(shù)量明顯多于模型組(P<0.05)。RT-PCR結(jié)果顯示,雙基...

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【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 實驗動物和主要試劑
    1.2 脊柱側(cè)彎鼠模型的構(gòu)建和實驗分組
    1.3 shRNA-TRPV2干擾載體和shRNA-TRPV4干擾載體的構(gòu)建
    1.4 RT-qPCR檢測BMP,BGP和ALP的mRNA表達水平
    1.5 各組大鼠Masson染色
    1.6 各組大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色
    1.7 統(tǒng)計學分析
2 結(jié)果
    2.1 shRNA-TRPV2慢病毒載體的構(gòu)建和轉(zhuǎn)染
    2.2 shRNA-TRPV4慢病毒載體的構(gòu)建和轉(zhuǎn)染
    2.3 影像學結(jié)果
    2.4 Masson染色結(jié)果
    2.5 TRAP染色結(jié)果
    2.6 RT-qPCR檢測成骨相關(guān)組織
3 討論



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