目的構(gòu)建以綿羊李斯特菌(Listerria ivanovii,LI)為載體的表達結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)特征性抗原蛋白的疫苗候選菌株,并評價其生物安全性和免疫效果。方法將MTB早期感染、潛伏感染和復(fù)發(fā)階段的4種抗原基因的細胞表位串聯(lián)形成融合抗原基因,即多階段結(jié)核桿菌抗原基因,命名為msv。將msv插入含有LI同源序列的打靶質(zhì)粒,利用同源重組技術(shù)構(gòu)建基因組整合msv抗原基因的重組LI菌株。觀察重組菌株的體外生長情況,通過Western blot驗證靶抗原蛋白的表達情況,測定重組菌株對C57BL/6小鼠的半數(shù)致死量(50%lethal dose,LD₅₀),以0.1×LD₅₀為免疫劑量,通過尾靜脈接種小鼠,通過接種前及接種后1、2、3、5、7、14 d的血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)水平、臟器載菌量和臟器病理切片評價疫苗候選株的安全性。為測定疫苗候選株的免疫效果,另取3組小鼠分別尾靜脈免疫LI-msv、LI、NS,免疫后第9天制備脾懸液,流式細胞術(shù)檢測分泌干擾素-γ(IFN-γ)、腫瘤壞死因子-α(T...

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