該文探討了SIRT3激動劑(Honokiol,HKL)對乙肝病毒(Hepatitis B virus,HBV)轉錄和復制的影響。培養(yǎng)HepG2-NTCP和人原代肝細胞(primary human hepatocytes,PHH),感染HBV顆粒后,用Honokiol(5 μmol/L、10 μmol/L、20 μmol/L)處理細胞后繼續(xù)培養(yǎng)10天,通過熒光定量PCR檢測細胞內(nèi)HBV DNA、cccDNA和HBV RNAs水平,Southern blot實驗進一步檢測胞內(nèi)HBV DNA水平。構建SIRT3-KO細胞,檢測敲除SIRT3后,Honokiol對細胞內(nèi)HBV DNA、cccDNA和HBV RNAs的影響。通過小鼠尾靜脈高壓注射pCMV-KRAB-Cre質粒和precccDNA質粒構建持續(xù)感染小鼠模型,一周后腹腔注射Honokiol持續(xù)20天。熒光定量PCR檢測小鼠血清中HBV DNA拷貝數(shù),肝組織內(nèi)HBV DNA、cccDNA和HBV RNAs水平。結果表明,Honokiol濃度依賴性地抑制HepG2-NTCP和PHH細胞內(nèi)HBV DNA以及HBV RNAs水平,此外,Hon...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 細胞培養(yǎng)
        1.2.2 HBV DNA的提取及Southern blot實驗
        1.2.3 血清及肝組織HBV DNA的提取
        1.2.4 Hirt法提取HBV cccDNA
        1.2.5 熒光定量PCR
        1.2.6 MTT實驗
        1.2.7 Western blot實驗
        1.2.8 動物實驗
        1.2.9 統(tǒng)計學分析
2 結果
    2.1 HKL對HepG2-NTCP和PHH細胞毒性的影響
    2.2 HKL對HepG2-NTCP和PHH細胞HBV DNA水平的影響
    2.3 HKL對HepG2-NTCP和PHH細胞HBV RNAs水平的影響
    2.4 HKL對HepG2-NTCP和PHH細胞HBV cccDNA水平及轉錄活性的影響
    2.5 HKL抑制HBV復制和轉錄與SIRT3相關
    2.6 在HBV持續(xù)感染小鼠模型中驗證HKL的抗病毒作用
3 討論



本文編號：3877960