水痘-帶狀皰疹病毒(VZV)是一種可以引起水痘和帶狀皰疹(HZ)的病原體,通過呼吸道和密切接觸在人群中傳播,可以引發(fā)水痘和帶狀皰疹兩種不同臨床癥狀的疾病。人群對該病毒易感性強,主動免疫是減輕帶狀皰疹疾病負(fù)擔(dān)的重要手段。g E蛋白是VZV抗原性最強、含量最豐富的外膜蛋白,是目前制備帶狀皰疹亞單位疫苗重要的候選蛋白。該研究通過原核系統(tǒng)表達(dá)帶狀皰疹g E蛋白,篩選合適的佐劑為制備帶狀皰疹亞單位疫苗提供依據(jù)。構(gòu)建大腸桿菌重組系統(tǒng)表達(dá)VZV外膜蛋白E胞外區(qū),用鎳離子螯合層析技術(shù)純化目的蛋白,用鋁佐劑和Poly I:C佐劑分別與重組蛋白混合后免疫小鼠,檢測抗血清免疫效價及相關(guān)細(xì)胞因子含量來比較佐劑對小鼠免疫應(yīng)答的影響。構(gòu)建的大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)成功表達(dá)目的蛋白,其表達(dá)形式主要為包涵體,通過變性復(fù)性獲得相對分子質(zhì)量約為63 ku的目的蛋白。免疫后的小鼠產(chǎn)生高效價及高特異性的血清抗體,經(jīng)檢測鋁佐劑和Poly I:C佐劑均有較強的的免疫增強效果,并有明顯的劑量效應(yīng)關(guān)系。鋁佐劑對Th2型細(xì)胞因子(IL-5,IL-10)具有更強烈的刺激作用。而對于Th1型細(xì)胞因子IL-2的分泌促進,Poly I:C佐劑優(yōu)于鋁佐...

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【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 目的基因的篩選、優(yōu)化及化學(xué)合成
    1.3 重組質(zhì)粒的提取，轉(zhuǎn)化及表達(dá)鑒定
    1.4 重組蛋白誘導(dǎo)表達(dá)條件的優(yōu)化
    1.5 包涵體蛋白的純化及復(fù)性
    1.6 小鼠免疫及免疫佐劑的比較
2 結(jié)果
    2.1 目的基因的篩選，優(yōu)化及合成
    2.2 重組質(zhì)粒的鑒定及高表達(dá)菌株的篩選
    2.3 重組蛋白誘導(dǎo)條件的比較
    2.4包涵體蛋白的純化
    2.5 小鼠血清抗體特異性鑒定
    2.6 小鼠血清抗體效價測定
    2.7 雙抗體夾心法測定小鼠血清細(xì)胞因子
3 討論



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