目的探索caf1基因缺失對鼠疫耶爾森菌體外生物學(xué)特性與對小鼠致病性的影響。方法利用CRISPR/Cas12a介導(dǎo)的基因編輯技術(shù)構(gòu)建鼠疫耶爾森菌caf1基因缺失株,并通過PCR技術(shù)對caf1基因缺失驗證。比較鼠疫耶爾森菌caf1基因缺失株和野生株201在生長速率、液體培養(yǎng)狀態(tài)、聚集情況等體外生物學(xué)特性和對小鼠致病性等方面的差異。結(jié)果 PCR擴增結(jié)果證實,caf1基因缺失株構(gòu)建成功。體外生物學(xué)特征分析表明,與野生株相比,caf1基因缺失株的形態(tài)學(xué)和生長速率并未發(fā)生明顯變化,自凝聚率升高。肺遞送途徑LD₅₀分析表明,caf1的缺失導(dǎo)致鼠疫耶爾森菌氣溶膠感染小鼠半數(shù)致死劑量顯著降低。結(jié)論不同途徑感染結(jié)果表明,caf1基因缺失株相較于野生株,在肺遞送、滴鼻、皮下、尾靜脈注射4種途徑下對BALB/c小鼠的毒力均降低。caf1基因的缺失導(dǎo)致鼠疫耶爾森菌自凝聚率升高,對BALB/c小鼠致病性下降。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材 料
        1.1.1 菌株、質(zhì)粒及實驗動物
        1.1.2 試劑
        1.1.3 儀器
    1.2 方 法
        1.2.1 caf1基因缺失株的構(gòu)建
        1.2.2 caf1基因缺失株的鑒定
        1.2.3 細(xì)菌培養(yǎng)
        1.2.4 菌落形態(tài)觀察
        1.2.5 生長曲線測定
        1.2.6 菌株自凝聚率測定
        1.2.7 氣溶膠肺遞送途徑感染小鼠LD50測定
        1.2.8 不同途徑感染小鼠生存曲線觀察
        1.2.9 統(tǒng)計學(xué)分析
2 結(jié) 果
    2.1 caf1基因缺失株的鑒定
    2.2 菌落形態(tài)觀察
    2.3 菌株生長曲線分析
    2.4 菌株自凝聚率比較
    2.5 氣溶膠肺遞送途徑感染小鼠LD50比較
    2.6 不同途徑小鼠感染試驗
3 討 論



本文編號：3874077