目的·探究雷帕霉素靶蛋白復(fù)合物1(mechanistic target of rapamycin complex 1,mTORC1)對(duì)3型固有淋巴細(xì)胞(group 3 innate lymphoid cell,ILC3)功能的影響。方法·使用mTORC1信號(hào)通路的特異性抑制劑雷帕霉素體外刺激野生型C57BL/6小鼠腸道固有層淋巴細(xì)胞(lamina propria leukocyte,LPL),初步觀察ILC3細(xì)胞數(shù)量及功能的變化;之后采用流式細(xì)胞技術(shù)分選出小鼠腸道ILC3,用白細(xì)胞介素23(interleukin 23,IL-23)刺激使其活化,再通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)活化后ILC3中編碼轉(zhuǎn)錄因子視黃酸受體相關(guān)的孤兒核受體(retinoic acid receptor related orphan receptor,RORγt)、IL-22及mTORC1關(guān)鍵組分Raptor(regulatory associated protein of mTOR)的基因mRNA水平;構(gòu)建ILC3細(xì)胞特異性敲除Raptor的基因工程小鼠,使用蘇木精-伊紅染色、流式細(xì)胞技術(shù)和實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)m...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.1.2 主要試劑與儀器
    1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        1.2.1 小鼠腸道固有層淋巴細(xì)胞的分離
        1.2.2流式染色
        1.2.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 體外雷帕霉素刺激抑制ILC3分泌IL-22
    2.2 IL-23刺激后ILC3中Rptor mRNA水平表達(dá)上調(diào)
    2.3 mTORC1功能缺失不影響小鼠腸道ILC3的數(shù)量
    2.4 mTORC1功能缺失抑制ILC3分泌IL-22的能力
3 討論



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