目的:解析抗Ep CAM+CD3雙特異性抗體(Bs Ab)的關(guān)鍵表征。方法:以抗Ep CAM+CD3雙特異性抗體為研究對象,超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(LC-MS/MS)檢測相對分子質(zhì)量、肽圖(氨基酸序列)、N-糖基化位點、糖型及各糖型含量、二硫鍵位點;表面等離子體共振(SPR)技術(shù)測定其與上皮細胞粘附因子(Ep CAM)、白細胞分化簇3(CD3)和Fc受體(Fc Rs)的親和力。結(jié)果:含糖基化的完整抗體、輕鏈、重鏈和單鏈的相對分子質(zhì)量分別為128 521.78、24 117.83、50 808.85和53 585.87;不含糖完整抗體、輕鏈、重鏈和單鏈的相對分子質(zhì)量分別為125 633.30、24 117.85、49 364.53和52 141.30;對象Bs Ab氨基酸序列與理論序列一致;N-糖基化位點位于重鏈Asn₃₀₀和單鏈Asn₃₂₆;N-連接寡糖的糖型包括以巖藻糖化的雙天線復雜N-糖(G0F占全部糖型含量77.10%)為主的11種糖型;對象Bs Ab內(nèi)含13對二硫鍵;單鏈第Cys₁₀₅位和第Cys

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【文章目錄】：
1 儀器、樣品與試劑
    1.1 儀器和設備
    1.2 研究用樣品
    1.3 主要試劑
2 方法與結(jié)果
    2.1 完整抗體相對分子質(zhì)量分析
    2.2 抗體亞基相對分子質(zhì)量分析
    2.3 肽圖分析
    2.4 二硫鍵分析
    2.5 糖型分析及N-糖基化修飾位點分析
        2.5.1 糖型
        2.5.2 N-糖基化修飾位點
    2.6 親和力分析
        2.6.1 樣品與Ep CAM親和力檢測
        2.6.2 樣品與CD3親和力檢測
        2.6.3 樣品與FcR親和力檢測
        2.6.4 樣品與FcRn親和力檢測
        2.6.5 曲妥珠單抗與FcRs親和力檢測
        2.6.6 檢測結(jié)果
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