發(fā)布時間：2023-03-18 14:40

　　合理的動物模型對2型糖尿病(Type 2 Diabetes mellitus,T2DM)的研究至關重要。鏈脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)對胰腺組織β細胞具有特異毒性作用,因此被廣泛應用于糖尿病動物模型的制作。高脂高糖食物聯(lián)合低劑量STZ誘導T2DM模型具有造模時間短,成模率高和造模成本低等特點,是目前應用最廣泛的造模方法,但是人類T2DM的發(fā)生與STZ沒有直接的關系,目前最理想的T2DM模型制作方法仍為高脂高糖自然食物誘導。本研究旨在通過構建高脂高糖食物聯(lián)合低劑量STZ誘導和單純高脂高糖食物誘導的廣西巴馬小型豬T2DM模型,分別進行模型豬肝臟組織轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平的差異分析,并完成差異候選基因在細胞表達水平和小鼠T2DM模型中的表達驗證,為T2DM動物模型的合理應用提供科學的理論依據(jù)。主要試驗結(jié)果如下:1、STZ和食物誘導的廣西巴馬小型豬T2DM模型構建選取22頭20-22 kg雌性巴馬小型豬用于T2DM模型制作。隨機分為4組:第一組(n=4)用基礎飼料飼喂10個月(Control,Ctrl);第二組(n=10)高脂高糖飼料飼喂10個月(DM1_H...

【文章頁數(shù)】：147 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
文中關鍵縮略詞中英文對照
第一章 綜述
    1 2型糖尿病簡介
    2 T2DM實驗動物模型的研究進展
        2.1 自發(fā)型T2DM動物模型的應用
        2.2 誘導型T2DM動物模型的應用
    3 STZ與T2DM動物模型
        3.1 STZ的結(jié)構特點
        3.2 STZ給藥途徑和應用劑量的研究
        3.3 STZ的分解和代謝
        3.4 STZ在動物模型中的實際應用
        3.5 高脂高糖飲食聯(lián)合低劑量STZ誘導T2DM動物模型的優(yōu)點
    4 肝臟與T2DM的關系
        4.1 肝臟中的糖代謝
        4.2 肝臟與胰島素抵抗
    5 轉(zhuǎn)錄組學和蛋白質(zhì)組學技術在糖尿病研究領域的應用
        5.1 轉(zhuǎn)錄組學在糖尿病研究中的應用
        5.2 蛋白質(zhì)組學在糖尿病研究中的應用
    6 小型豬疾病模型的應用和發(fā)展
    7 研究目的和意義
第二章 STZ和食物誘導的廣西巴馬小型豬T2DM模型構建及成模特點比較分析
    1 材料
        1.1 試驗動物
        1.2 動物日糧
        1.3 試驗耗材和試劑
        1.4 試驗儀器
    2 試驗方法
        2.1 試驗動物的飼養(yǎng)
        2.2 血液生理生化指標的測定
        2.3 靜脈注射葡萄糖耐實驗(IVGTT)
        2.4 胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)的計算
        2.5 病理切片制作
        2.6 巴馬小型豬T2DM模型標準
        2.7 數(shù)據(jù)處理
    3 結(jié)果
        3.1 體重測定
        3.2 血清生理生化指標測定結(jié)果
        3.3 靜脈葡萄糖耐試驗結(jié)果
        3.4 HOMA-IR計算
        3.5 病理試驗結(jié)果
    4 討論
    5 本章小結(jié)
第三章 STZ和食物誘導的廣西巴馬小型豬T2DM模型肝臟轉(zhuǎn)錄組比較分析
    1 材料
        1.1 動物樣品
        1.2 試驗試劑
        1.3 試驗儀器
    2 試驗方法
        2.1 轉(zhuǎn)錄組建庫測序方法
        2.2 轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析方法
        2.3 轉(zhuǎn)錄差異基因表達驗證
        2.4 qRT-PCR數(shù)據(jù)分析
    3 結(jié)果
        3.1 RNA提取和檢測
        3.2 樣品測序數(shù)據(jù)統(tǒng)計
        3.3 測序片段與參考基因組比對結(jié)果
        3.4 樣品RNA-Seq相關性分析
        3.5 差異表達基因統(tǒng)計
        3.6 GO分析差異基因功能
        3.7 KEGG分析差異基因功能
        3.8 差異基因表達驗證
    4 討論
    5 本章小結(jié)
第四章 STZ和食物誘導的廣西巴馬小型豬T2DM模型肝臟蛋白質(zhì)組學比較分析
    1 材料
        1.1 動物樣品
        1.2 試驗試劑
        1.3 試驗儀器
    2 方法
        2.1 iTRAQ標記定量蛋白質(zhì)組學技術流程
        2.2 蛋白質(zhì)組學數(shù)據(jù)分析方法
        2.3 轉(zhuǎn)錄組學和蛋白質(zhì)組學聯(lián)合分析方法
        2.4 Western Blot方法
    3 結(jié)果
        3.1 iTRAQ標記試驗結(jié)果
        3.2 差異蛋白統(tǒng)計結(jié)果
        3.3 差異蛋白聚類熱圖
        3.4 差異蛋白GO分析
        3.5 差異蛋白KEGG分析
        3.6 差異蛋白網(wǎng)絡互作(PPI)分析
        3.7 轉(zhuǎn)錄組學和蛋白質(zhì)組學聯(lián)合分析結(jié)果
        3.8 Western Blot驗證RPL15基因的表達
    4 討論
    5 本章小結(jié)
第五章 候選基因RPL15的克隆和細胞水平的功能驗證
    1 材料
        1.1 試驗動物樣品
        1.2 試驗細胞株及質(zhì)粒
        1.3 試驗試劑
        1.4 試驗儀器
    2 試驗方法
        2.1 肝臟樣品RNA的提取和cDNA的合成
        2.2 RPL15基因引物設計與合成
        2.3 RPL15基因克隆
        2.4 RPL15基因序列分析
        2.5 RPL15基因過表達載體構建
        2.6 RPL15基因干擾載體構建
        2.7 HEPG2細胞復蘇與培養(yǎng)
        2.8 HEPG2細胞轉(zhuǎn)染
        2.9 qRT-PCR檢測RPL15互作基因的表達
        2.10 qRT-PCR檢測相關癌基因和抑癌基因的表達
        2.11 數(shù)據(jù)處理和分析
    3 結(jié)果
        3.1 廣西巴馬小型豬RPL15基因克隆
        3.2 廣西巴馬小型豬RPL15基因序列分析
        3.3 RPL15基因真核表達載體酶切驗證
        3.4 HEPG2肝臟細胞RPL15基因過表達結(jié)果
        3.5 HEPG2肝臟細胞RPL15基因表達干擾結(jié)果
        3.6 RPL15互作基因的表達驗證
        3.7 HEPG2肝臟細胞中癌基因和抑癌基因的表達
    4 討論
    5 本章小結(jié)
第六章 候選基因RPL15在小鼠T2DM模型中的表達分析
    1 材料
        1.1 試驗動物
        1.2 動物日糧
        1.3 試驗耗材和試劑
        1.4 試驗儀器
    2 試驗方法
        2.1 試驗動物的飼養(yǎng)
        2.2 空腹血糖檢測
        2.3 腹腔注射葡萄糖耐試驗(IGTT)
        2.4 qRT-PCR檢測小鼠RPL15基因組織表達
        2.5 Western Blot驗證小鼠肝臟RPL15基因的表達
        2.6 數(shù)據(jù)分析
    3 結(jié)果
        3.1 體重測定
        3.2 空腹血糖(FBG)測定結(jié)果
        3.3 腹腔注射葡萄糖耐試驗(IGTT)結(jié)果
        3.4 小鼠RPL15基因組織表達分析
        3.5 Western Blot驗證RPL15蛋白在肝臟的表達
    4 討論
    5 本章小結(jié)
全文總結(jié)與創(chuàng)新
    1 總結(jié)
    2 本研究的創(chuàng)新點
參考文獻
附錄
致謝
攻讀學位期間發(fā)表論文情況



本文編號：3763322