目的原核表達(dá)重組人抗繆勒管激素（human anti-Müllerian hormone,hAMH）C-末端蛋白,并進(jìn)行純化。方法 PCR法擴(kuò)增hAMH C-末端蛋白基因,插入至載體pET-28a,構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pET-28a-hAMH C。重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化感受態(tài)E. coli BL21（DE3）,終濃度為1. 0 mmol/L的IPTG誘導(dǎo)表達(dá)h AMH C-末端蛋白。擴(kuò)大培養(yǎng)后進(jìn)行Ni親和層析柱純化,12%SDS-PAGE分析純化產(chǎn)物。結(jié)果經(jīng)菌落PCR及測(cè)序鑒定,重組質(zhì)粒pET-28a-hAMH C構(gòu)建正確。表達(dá)及純化產(chǎn)物均可見(jiàn)相對(duì)分子質(zhì)量約12 500的目的蛋白條帶,純度達(dá)90%以上。結(jié)論原核表達(dá)了重組hAMH C-末端蛋白,純化后獲得了較高純度的目的蛋白。 

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 質(zhì)粒、菌株及細(xì)胞
    1.2 主要試劑及儀器
    1.3 細(xì)胞培養(yǎng)
    1.4 目的基因的擴(kuò)增
    1.5 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
    1.6重組蛋白誘導(dǎo)表達(dá)
    1.7 擴(kuò)大培養(yǎng)
    1.8 目的蛋白的純化
2 結(jié)果
    2.1 目的基因PCR產(chǎn)物的鑒定
    2.2 重組質(zhì)粒的鑒定
    2.3 重組蛋白的鑒定
    2.4 純化產(chǎn)物的鑒定
3討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]抗繆勒管激素的臨床應(yīng)用[J]. 邱玲,李丹丹,程歆琦.  協(xié)和醫(yī)學(xué)雜志. 2017(Z2)
[2]羅非魚(yú)AMH基因的原核表達(dá)及多克隆抗體制備[J]. 丁煒東,曹哲明,曹麗萍.  水產(chǎn)學(xué)報(bào). 2010(05)

碩士論文
[1]Prdx6-11R融合蛋白的表達(dá)、純化及功能的初步研究[D]. 韓俊嶺.寧夏醫(yī)科大學(xué) 2014
[2]IER5原核表達(dá)載體的構(gòu)建及融合蛋白表達(dá)、純化[D]. 梁桂芳.河北醫(yī)科大學(xué) 2010



本文編號(hào)：3733670