背景 認(rèn)知障礙是腦疾病中診治最困難的疾病之一,阿爾茨海默病（Alzheimer’s Disease,AD）是老年人最常見的以認(rèn)知功能障礙為主要表現(xiàn)的神經(jīng)退行性疾病。近年來研究發(fā)現(xiàn),長(zhǎng)期暴露于濃度超標(biāo)的甲醛環(huán)境,會(huì)損傷人的學(xué)習(xí)記憶、情感認(rèn)知等功能,也有報(bào)道稱AD病人和小鼠模型尿液和腦組織中內(nèi)源性甲醛含量均升高。甲醇是一種毒性物質(zhì),有研究認(rèn)為它在體內(nèi)發(fā)揮毒性主要通過中間代謝產(chǎn)物甲醛,低濃度甲醇慢性喂養(yǎng)恒河猴,可以引起認(rèn)知障礙和磷酸化tau蛋白的增多。但甲醇/內(nèi)源性甲醛引起認(rèn)知損傷的機(jī)制尚不確定,對(duì)于甲醇慢性暴露造成的機(jī)體損傷尚無研究全面闡述。本課題擬通過體外實(shí)驗(yàn)探討甲醛對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的損傷作用,通過體內(nèi)恒河猴實(shí)驗(yàn)建立認(rèn)知障礙模型,并分析其機(jī)制及甲醇慢性暴露對(duì)機(jī)體的影響。方法 在體外細(xì)胞水平,將SH-SY5Y神經(jīng)瘤細(xì)胞暴露于不同濃度的甲醛。采用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞活性實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移、形態(tài)、活性和增殖能力;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡;透射電鏡觀察超微結(jié)構(gòu)改變;多因子檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞上清炎性因子;Western Blotting檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)磷酸化tau蛋白、Aβ及線粒體分裂相關(guān)蛋白的表達(dá)。在體內(nèi)動(dòng)物水平,... 

【文章頁(yè)數(shù)】：166 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
中英文縮略詞
摘要
Abstract
第一部分 甲醛對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞的損傷作用
    前言
    材料和方法
        1. 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1 細(xì)胞系來源
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器設(shè)備和耗材
            1.4 主要試劑配制
        2. 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)分組與處理
            2.3 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)
            2.4 細(xì)胞活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
            2.5 細(xì)胞凋亡檢測(cè)
            2.6 細(xì)胞炎性因子檢測(cè)
            2.7 透射電鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)
            2.8 免疫印跡法檢測(cè)相關(guān)蛋白表達(dá)情況
        3. 統(tǒng)計(jì)方法
    結(jié)果
        1. 甲醛對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞遷移能力的影響
        2. 甲醛對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞活性的影響
        3. 甲醛促進(jìn)SH-SY5Y細(xì)胞凋亡
        4. 甲醛對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞炎性因子的影響
        5. 甲醛促進(jìn)SH-SY5Y細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的損傷
        6. 甲醛上調(diào)SH-SY5Y細(xì)胞磷酸化tau蛋白及線粒體裂解相關(guān)蛋白
    討論
    小結(jié)
第二部分 甲醇致恒河猴認(rèn)知障礙模型的建立與相關(guān)機(jī)制研究
    前言
    材料和方法
        1. 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            1.2 主要試劑
            1.3 主要抗體
            1.4 主要儀器設(shè)備
            1.5 主要耗材
        2. 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 恒河猴分組與處理
            2.2 行為學(xué)訓(xùn)練及實(shí)驗(yàn)
            2.3 恒河猴標(biāo)本采集(血液、腦脊液、尿液及糞便)
            2.4 尿液甲醛含量檢測(cè)
            2.5 病理學(xué)方法檢測(cè)
            2.6 炎性多因子檢測(cè)
            2.7 免疫印跡法檢測(cè)腦組織蛋白表達(dá)
            2.8 恒河猴腸道微生物菌群檢測(cè)
            2.9 恒河猴尿液代謝組學(xué)檢測(cè)
        3. 統(tǒng)計(jì)方法
    結(jié)果
        1. 行為學(xué)結(jié)果
            1.1 VSDRT檢測(cè)到恒河猴記憶能力下降
            1.2 空間識(shí)別轉(zhuǎn)換任務(wù)結(jié)果
            1.3 ORT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)到恒河猴認(rèn)知能力下降
            1.4 OR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)到恒河猴認(rèn)知能力下降
            1.5 Viewpoint測(cè)試檢測(cè)到恒河猴運(yùn)動(dòng)量的增加
            1.6 Viewpoint測(cè)試未檢測(cè)到恒河猴睡眠障礙
        2. 病理學(xué)檢測(cè)結(jié)果
        3. 尿液甲醛含量檢測(cè)結(jié)果
        4. 炎性多因子檢測(cè)結(jié)果
        5. 血常規(guī)及生化、便常規(guī)及鏡檢檢測(cè)結(jié)果
        6. 免疫印跡檢測(cè)結(jié)果
        7. 恒河猴腸道微生物菌群檢測(cè)結(jié)果
            7.1 物種相對(duì)豐度分析
            7.2 組間差異物種分析
            7.3 組間腸道菌群差異分析(T-test檢驗(yàn)法)
        8. 恒河猴尿液代謝組學(xué)檢測(cè)結(jié)果
            8.1 恒河猴尿液差異代謝物分析
            8.2 恒河猴尿液差異代謝物KEGG通路分析
    討論
    小結(jié)
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡(jiǎn)歷
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]神經(jīng)生長(zhǎng)因子對(duì)低氧缺血新生鼠紋狀體內(nèi)膽堿能神經(jīng)元的保護(hù)作用[J]. 于曉虹,華仲慰,李玉書.  生理學(xué)報(bào). 1993(04)



本文編號(hào)：3696754