背景 認知障礙是腦疾病中診治最困難的疾病之一,阿爾茨海默�。ˋlzheimer’s Disease,AD）是老年人最常見的以認知功能障礙為主要表現(xiàn)的神經(jīng)退行性疾病。近年來研究發(fā)現(xiàn),長期暴露于濃度超標的甲醛環(huán)境,會損傷人的學習記憶、情感認知等功能,也有報道稱AD病人和小鼠模型尿液和腦組織中內(nèi)源性甲醛含量均升高。甲醇是一種毒性物質(zhì),有研究認為它在體內(nèi)發(fā)揮毒性主要通過中間代謝產(chǎn)物甲醛,低濃度甲醇慢性喂養(yǎng)恒河猴,可以引起認知障礙和磷酸化tau蛋白的增多。但甲醇/內(nèi)源性甲醛引起認知損傷的機制尚不確定,對于甲醇慢性暴露造成的機體損傷尚無研究全面闡述。本課題擬通過體外實驗探討甲醛對神經(jīng)細胞的損傷作用,通過體內(nèi)恒河猴實驗建立認知障礙模型,并分析其機制及甲醇慢性暴露對機體的影響。方法 在體外細胞水平,將SH-SY5Y神經(jīng)瘤細胞暴露于不同濃度的甲醛。采用細胞劃痕實驗、細胞活性實驗檢測細胞遷移、形態(tài)、活性和增殖能力;流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡;透射電鏡觀察超微結(jié)構(gòu)改變;多因子檢測技術(shù)檢測細胞上清炎性因子;Western Blotting檢測細胞內(nèi)磷酸化tau蛋白、Aβ及線粒體分裂相關(guān)蛋白的表達。在體內(nèi)動物水平,... 

【文章頁數(shù)】：166 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
中英文縮略詞
摘要
Abstract
第一部分 甲醛對SH-SY5Y細胞的損傷作用
    前言
    材料和方法
        1. 實驗材料
            1.1 細胞系來源
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器設(shè)備和耗材
            1.4 主要試劑配制
        2. 實驗方法
            2.1 細胞培養(yǎng)
            2.2 細胞實驗分組與處理
            2.3 細胞劃痕實驗
            2.4 細胞活性檢測實驗
            2.5 細胞凋亡檢測
            2.6 細胞炎性因子檢測
            2.7 透射電鏡觀察細胞超微結(jié)構(gòu)
            2.8 免疫印跡法檢測相關(guān)蛋白表達情況
        3. 統(tǒng)計方法
    結(jié)果
        1. 甲醛對SH-SY5Y細胞遷移能力的影響
        2. 甲醛對SH-SY5Y細胞活性的影響
        3. 甲醛促進SH-SY5Y細胞凋亡
        4. 甲醛對SH-SY5Y細胞炎性因子的影響
        5. 甲醛促進SH-SY5Y細胞超微結(jié)構(gòu)的損傷
        6. 甲醛上調(diào)SH-SY5Y細胞磷酸化tau蛋白及線粒體裂解相關(guān)蛋白
    討論
    小結(jié)
第二部分 甲醇致恒河猴認知障礙模型的建立與相關(guān)機制研究
    前言
    材料和方法
        1. 實驗材料
            1.1 實驗動物
            1.2 主要試劑
            1.3 主要抗體
            1.4 主要儀器設(shè)備
            1.5 主要耗材
        2. 實驗方法
            2.1 恒河猴分組與處理
            2.2 行為學訓練及實驗
            2.3 恒河猴標本采集(血液、腦脊液、尿液及糞便)
            2.4 尿液甲醛含量檢測
            2.5 病理學方法檢測
            2.6 炎性多因子檢測
            2.7 免疫印跡法檢測腦組織蛋白表達
            2.8 恒河猴腸道微生物菌群檢測
            2.9 恒河猴尿液代謝組學檢測
        3. 統(tǒng)計方法
    結(jié)果
        1. 行為學結(jié)果
            1.1 VSDRT檢測到恒河猴記憶能力下降
            1.2 空間識別轉(zhuǎn)換任務(wù)結(jié)果
            1.3 ORT實驗檢測到恒河猴認知能力下降
            1.4 OR實驗檢測到恒河猴認知能力下降
            1.5 Viewpoint測試檢測到恒河猴運動量的增加
            1.6 Viewpoint測試未檢測到恒河猴睡眠障礙
        2. 病理學檢測結(jié)果
        3. 尿液甲醛含量檢測結(jié)果
        4. 炎性多因子檢測結(jié)果
        5. 血常規(guī)及生化、便常規(guī)及鏡檢檢測結(jié)果
        6. 免疫印跡檢測結(jié)果
        7. 恒河猴腸道微生物菌群檢測結(jié)果
            7.1 物種相對豐度分析
            7.2 組間差異物種分析
            7.3 組間腸道菌群差異分析(T-test檢驗法)
        8. 恒河猴尿液代謝組學檢測結(jié)果
            8.1 恒河猴尿液差異代謝物分析
            8.2 恒河猴尿液差異代謝物KEGG通路分析
    討論
    小結(jié)
參考文獻
文獻綜述
    參考文獻
個人簡歷
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]神經(jīng)生長因子對低氧缺血新生鼠紋狀體內(nèi)膽堿能神經(jīng)元的保護作用[J]. 于曉虹,華仲慰,李玉書.  生理學報. 1993(04)



本文編號：3696754