該文通過制備出特異性高的單克隆抗體,初步建立了雙抗夾心ELISA定量測定CK-MB的方法,為CK-MB試劑和原料的國產化奠定重要的基礎。以購入的CK-MB抗原為免疫原,對隨機選取的5只6～8周齡Balb/c健康雌性小鼠進行免疫。采用有限稀釋法、間接ELISA、捕獲ELISA方法,最終篩選出了3株能夠穩(wěn)定分泌抗體的細胞株,分別命名為2F6、2H3和2H9,其分泌的單克隆抗體亞型均為IgG3,腹水效價分別為1:102000、1:51200和1:102000。采用親和層析法對3株雜交瘤細胞產生的小鼠腹水進行純化,分光光度計測定純化后的單克隆抗體2H3、2F6、2H9的濃度分別為5 mg/mL、6 mg/mL、6 mg/mL, SDS-PAGE結果表明,成功純化了小鼠腹水,能夠清晰地觀察到輕鏈和重鏈兩條帶。Western blot結果表明,單克隆抗體2F6、2H3和2H9均能特異性識別CK-MB蛋白。間接ELISA及捕獲ELISA方法檢測顯示,單克隆抗體2H3只與CK-MB及CK-BB發(fā)生捕獲ELISA方法反應;單克隆抗體2H9只與CK-MB及CK-BB發(fā)生捕獲ELISA方法反應;單克隆抗體2... 

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 實驗方法
        1.2.1 動物免疫及效價測定
        1.2.2 陽性雜交瘤細胞的篩選及克隆
        1.2.3 單克隆抗體腹水的制備、純化
        1.2.4 單克隆抗體亞型的鑒定
        1.2.5 單克隆抗體親和力測定
        1.2.6 細胞穩(wěn)定性實驗
        1.2.7 單克隆抗體的特異性鑒定
        1.2.8 CK-MB定量檢測試劑的初步建立
2 結果與分析
    2.1 免疫小鼠血清效價檢測結果
    2.2 雜交瘤細胞株的建立
    2.3 單抗腹水的產生及純化
    2.4 單抗亞型的鑒定
    2.5 單抗親和常數(shù)測定
    2.6 細胞穩(wěn)定性實驗
    2.7 單克隆抗體特異性檢測
    2.8 CK-MB檢測方法的建立
        2.8.1 捕獲抗體最佳包被濃度和酶標抗體最佳稀釋濃度的確定
        2.8.2 樣品稀釋緩沖液的選擇
        2.8.3 酶標抗體作用時間的選擇
        2.8.4 標準曲線的建立
        2.8.5 準確度實驗
        2.8.6 精密度實驗
        2.8.7 分析靈敏度實驗
        2.8.8 分析特異性
        2.8.9 抗干擾性實驗
        2.8.10 穩(wěn)定性實驗
        2.8.11 初步建立的定量檢測試劑盒與同類產品的比較
3 討論
4 結論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]基于N蛋白的PEDV間接ELISA檢測方法的建立與初步應用[J]. 張琪,徐麗美,周宏超,楊猛超,張淼濤,于三科,許信剛.  中國獸醫(yī)科學. 2018(02)
[2]CK-MB特異性單抗的制備方法及其應用[J]. 陳自敏,周國梁,徐偉玲,鄭小紅,童勛章,柯起沈,宋瀏偉,葛勝祥.  生物工程學報. 2017(01)
[3]聯(lián)合定量檢測急性心肌梗死標志物在診斷中的價值[J]. 姚雯穎.  檢驗醫(yī)學與臨床. 2007(07)
[4]中華醫(yī)學會檢驗學會文件心肌損傷標志物的應用準則[J]. 楊振華 ,潘柏申 ,許俊堂.  中華檢驗醫(yī)學雜志. 2002(03)
[5]極性小分子抗原包被條件的摸索[J]. 沈月雷,邱平,王劍鋒,戴斌,李德富.  細胞與分子免疫學雜志. 1997(01)

碩士論文
[1]人腦心肌炎病毒IgM捕獲ELISA方法的建立及初步應用[D]. 王丹.西北民族大學 2014



本文編號：3692358