目的:斑馬魚(yú)作為一種新型模式動(dòng)物已被廣泛應(yīng)用于藥學(xué)領(lǐng)域研究,但國(guó)內(nèi)外關(guān)于其作為藥物代謝模型的相關(guān)酶活性研究卻鮮有報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究不同生長(zhǎng)階段斑馬魚(yú)體內(nèi)藥物代謝酶CYP3A65 mRNA的表達(dá),篩選出藥物代謝酶表達(dá)量最高生長(zhǎng)期的斑馬魚(yú),以此生長(zhǎng)期的斑馬魚(yú)為研究對(duì)象,探究其肝微粒體中藥物代謝酶CYP3A65的酶活性,進(jìn)而評(píng)價(jià)斑馬魚(yú)作為藥物代謝模型的適用性。方法:采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法,檢測(cè)斑馬魚(yú)在幼年期（72 hpf,96 hpf,120 hpf,7 dpf,21 dpf）、青年期（30 dpf,45 dpf,60 dpf,75 dpf）和成年期（90dpf）三個(gè)生長(zhǎng)階段的全魚(yú)以及其肝和腸組織中藥物代謝酶CYP3A65 mRNA水平的表達(dá)。以NADPH-細(xì)胞色素C還原酶、紅霉素-N-脫甲基酶和睪酮羥化酶的活性為指標(biāo),檢測(cè)斑馬魚(yú)肝微粒體中CYP3A65的酶活性。結(jié)果:在青年期75 dpf的斑馬魚(yú)中,CYP3A65、PXR、AHR2 mRNA的表達(dá)最高,在生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中,藥物代謝酶及其上游核受體的基因表達(dá)趨勢(shì)也一致。對(duì)CYP3A65及其上游核受體PXR和AHR2進(jìn)行相關(guān)性分析,CYP3... 

【文章來(lái)源】：上海海洋大學(xué)上海市

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

細(xì)胞色素P450的代謝循環(huán)過(guò)程

上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文CYP450 酶在自然界分布廣泛，人類、動(dòng)物、植物、微生物，甚至病毒等均有CYP450 的存在。1968 年首次成功從兔肝微粒體中純化出 P450 體系，隨著哺乳動(dòng)物 CYP450 酶的研究，表明哺乳動(dòng)物中至少存在一種以上的 CYP450 酶。隨著基因組高通量測(cè)序及分析技術(shù)的發(fā)展，已知人類基因組上的 CYP450 基因數(shù)為 57 個(gè)，在其它重要模式生物如結(jié)核分枝桿菌、線蟲(chóng)、果蠅及植物擬南芥中都發(fā)現(xiàn)不同數(shù)量的 CYP450 酶基因。CYP450 酶是肝組織中藥物代謝的主要酶系[30]。根據(jù)氨基酸序列的不同進(jìn)行劃分，CYP450 酶可分為若干家族和亞家族，其中 CYP3A 亞家族占 CYP450 酶的 30%，文獻(xiàn)預(yù)計(jì)有 75%以上的臨床藥物由 CYP3A 亞家族代謝[31]。1994 年 Shimada 等對(duì) 30 例日本人及 30 例高加索人肝微粒體中 CYP450 進(jìn)行定量分析（圖 1-2-a）[32]。張等采用穩(wěn)定同位素稀釋內(nèi)標(biāo)-多反應(yīng)監(jiān)測(cè)-質(zhì)譜技術(shù)（SID-MRM-MS）對(duì) 100 例中國(guó)正常人肝中 10 種 CYP450 蛋白含量進(jìn)行測(cè)定，同時(shí)還對(duì)蛋白 mRNA 表達(dá)水平進(jìn)行定量（圖 1-2-b、1-2-c）[33]。ab c

23斑馬魚(yú)組織中 CYP3A65 和核受體 PXR、AHR2 mRNA 水平的相長(zhǎng)階段中，幼魚(yú)、青年魚(yú)和成年魚(yú)的全部魚(yú)組織中 CYP3A65（A表達(dá)。qRT-PCR 用于定量整個(gè)斑馬魚(yú)中的轉(zhuǎn)錄物的表達(dá)情況，以，其他組的樣本與其比較，確定相對(duì)表達(dá)量；數(shù)據(jù)的標(biāo)準(zhǔn)差用 統(tǒng)計(jì)學(xué)差異由*表示（*P < 0.05, **P < 0.01, ***P< 0.001）lative mRNA expression levels of CYP3A65 and nuclear receptor PXdanio rerio . Note:CYP3A65(A), PXR(B) andAHR2(C) gene expressienile fish and adult fish were detected during developmental stages; qRy transcript expression in whole danio rerio; relative fold was determi

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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