背景:如何促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞大量向神經(jīng)元分化是研究的難點。研究發(fā)現(xiàn),S100A4蛋白可能通過多種途徑在中樞神經(jīng)系統(tǒng)修復(fù)中發(fā)揮作用。目的:研究S100A4是否通過上調(diào)腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子表達(dá)進(jìn)而影響神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元樣細(xì)胞的分化。方法:購買鑒定合格的小鼠胚胎大腦海馬和室管膜下區(qū)來源的神經(jīng)干細(xì)胞,體外培養(yǎng)傳代,電穿孔法向神經(jīng)干細(xì)胞中轉(zhuǎn)染S100A4表達(dá)載體和/或腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子si RNA,轉(zhuǎn)染48h后向神經(jīng)元方向誘導(dǎo)分化,誘導(dǎo)分化3d后采用Westernblot檢測細(xì)胞中腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子及Tuj1蛋白表達(dá),免疫熒光檢測Tuj1陽性神經(jīng)元比例。結(jié)果與結(jié)論:①與轉(zhuǎn)染無關(guān)序列質(zhì)粒組比較,轉(zhuǎn)染S100A4組神經(jīng)干細(xì)胞中Tuj1陽性細(xì)胞比例及相應(yīng)的Tuj1、腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子的表達(dá)量顯著增高（P <0.01）;②與S100A4+siRNA無關(guān)序列共轉(zhuǎn)染組比較,S100A4+腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子siRNA共轉(zhuǎn)染組神經(jīng)干細(xì)胞中Tuj1陽性細(xì)胞比例及相應(yīng)的Tuj1、腦源性神經(jīng)生長因子的表達(dá)量顯著降低（P <0.01）;③結(jié)果表明,S100A4的過表達(dá)可促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元樣細(xì)胞分化,其可能通過... 

【文章來源】：中國組織工程研究. 2020,24(19)北大核心

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【部分圖文】：

S100A4表達(dá)載體轉(zhuǎn)染效率的驗證

圖5 Western blot檢測神經(jīng)干細(xì)胞轉(zhuǎn)染S100A4表達(dá)載體及siRNA-BDNF后Tuj1、BDNF蛋白的表達(dá)神經(jīng)干細(xì)胞因具有增殖快、自我更新能力較強(qiáng)并且可以遷移到病損部位的特點，已被廣泛應(yīng)用于對阿爾茨海默病、帕金森病、缺血性腦卒中等中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的研究中[14-17]。也有數(shù)據(jù)顯示，脊髓損傷之后神經(jīng)干細(xì)胞增殖能力明顯增強(qiáng)，從損傷的脊髓中分離培養(yǎng)得到神經(jīng)球數(shù)量明顯增加[18]。脊髓損傷后1-3 d神經(jīng)干細(xì)胞分裂增殖達(dá)峰值，在小鼠脊髓半切模型的中央管周圍發(fā)現(xiàn)大量Brdu陽性細(xì)胞，并遷移到損傷部位[19]；在外傷性脊髓損傷的脊髓中發(fā)現(xiàn)Nestin陽性室管膜細(xì)胞顯著增加[20]。同時，國內(nèi)外眾多學(xué)者進(jìn)行大量動物實驗發(fā)現(xiàn)移植到脊髓損傷部位的神經(jīng)干細(xì)胞可以通過分化作用替代損傷細(xì)胞、促進(jìn)軸突再生，通過神經(jīng)保護(hù)作用減少受損部位組織的壞死，進(jìn)而促進(jìn)神經(jīng)功能的恢復(fù)[21-26]。這些都說明利用神經(jīng)干細(xì)胞治療脊髓損傷具有美好的前景，然而神經(jīng)干細(xì)胞具有向神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞等細(xì)胞分化的潛能，如何誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞在脊髓損傷之后大量向神經(jīng)元分化，減少其向星形膠質(zhì)細(xì)胞分化的比例，對于減少脊髓損傷后瘢痕的形成，促進(jìn)損傷后的神經(jīng)修復(fù)具有重大意義。神經(jīng)干細(xì)胞的來源主要分為脊髓源性神經(jīng)干細(xì)胞及腦源性(大腦海馬區(qū)及側(cè)腦室室下區(qū))神經(jīng)干細(xì)胞[27]。研究表明，腦源性神經(jīng)干細(xì)胞的增殖能力以及誘導(dǎo)分化向神經(jīng)元分化的比例明顯高于脊髓源性神經(jīng)干細(xì)胞[28]。因此，該實驗選擇來源于胚胎小鼠大腦海馬區(qū)及側(cè)腦室室下區(qū)的神經(jīng)干細(xì)胞開展體外細(xì)胞實驗。

siRNA-BDNF干擾效率的驗證

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號：3426975