背景:如何促進神經(jīng)干細胞大量向神經(jīng)元分化是研究的難點。研究發(fā)現(xiàn),S100A4蛋白可能通過多種途徑在中樞神經(jīng)系統(tǒng)修復中發(fā)揮作用。目的:研究S100A4是否通過上調(diào)腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子表達進而影響神經(jīng)干細胞向神經(jīng)元樣細胞的分化。方法:購買鑒定合格的小鼠胚胎大腦海馬和室管膜下區(qū)來源的神經(jīng)干細胞,體外培養(yǎng)傳代,電穿孔法向神經(jīng)干細胞中轉(zhuǎn)染S100A4表達載體和/或腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子si RNA,轉(zhuǎn)染48h后向神經(jīng)元方向誘導分化,誘導分化3d后采用Westernblot檢測細胞中腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子及Tuj1蛋白表達,免疫熒光檢測Tuj1陽性神經(jīng)元比例。結(jié)果與結(jié)論:①與轉(zhuǎn)染無關(guān)序列質(zhì)粒組比較,轉(zhuǎn)染S100A4組神經(jīng)干細胞中Tuj1陽性細胞比例及相應的Tuj1、腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子的表達量顯著增高（P <0.01）;②與S100A4+siRNA無關(guān)序列共轉(zhuǎn)染組比較,S100A4+腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子siRNA共轉(zhuǎn)染組神經(jīng)干細胞中Tuj1陽性細胞比例及相應的Tuj1、腦源性神經(jīng)生長因子的表達量顯著降低（P <0.01）;③結(jié)果表明,S100A4的過表達可促進神經(jīng)干細胞向神經(jīng)元樣細胞分化,其可能通過... 

【文章來源】：中國組織工程研究. 2020,24(19)北大核心

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【部分圖文】：

S100A4表達載體轉(zhuǎn)染效率的驗證

圖5 Western blot檢測神經(jīng)干細胞轉(zhuǎn)染S100A4表達載體及siRNA-BDNF后Tuj1、BDNF蛋白的表達神經(jīng)干細胞因具有增殖快、自我更新能力較強并且可以遷移到病損部位的特點，已被廣泛應用于對阿爾茨海默病、帕金森病、缺血性腦卒中等中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的研究中[14-17]。也有數(shù)據(jù)顯示，脊髓損傷之后神經(jīng)干細胞增殖能力明顯增強，從損傷的脊髓中分離培養(yǎng)得到神經(jīng)球數(shù)量明顯增加[18]。脊髓損傷后1-3 d神經(jīng)干細胞分裂增殖達峰值，在小鼠脊髓半切模型的中央管周圍發(fā)現(xiàn)大量Brdu陽性細胞，并遷移到損傷部位[19]；在外傷性脊髓損傷的脊髓中發(fā)現(xiàn)Nestin陽性室管膜細胞顯著增加[20]。同時，國內(nèi)外眾多學者進行大量動物實驗發(fā)現(xiàn)移植到脊髓損傷部位的神經(jīng)干細胞可以通過分化作用替代損傷細胞、促進軸突再生，通過神經(jīng)保護作用減少受損部位組織的壞死，進而促進神經(jīng)功能的恢復[21-26]。這些都說明利用神經(jīng)干細胞治療脊髓損傷具有美好的前景，然而神經(jīng)干細胞具有向神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細胞等細胞分化的潛能，如何誘導神經(jīng)干細胞在脊髓損傷之后大量向神經(jīng)元分化，減少其向星形膠質(zhì)細胞分化的比例，對于減少脊髓損傷后瘢痕的形成，促進損傷后的神經(jīng)修復具有重大意義。神經(jīng)干細胞的來源主要分為脊髓源性神經(jīng)干細胞及腦源性(大腦海馬區(qū)及側(cè)腦室室下區(qū))神經(jīng)干細胞[27]。研究表明，腦源性神經(jīng)干細胞的增殖能力以及誘導分化向神經(jīng)元分化的比例明顯高于脊髓源性神經(jīng)干細胞[28]。因此，該實驗選擇來源于胚胎小鼠大腦海馬區(qū)及側(cè)腦室室下區(qū)的神經(jīng)干細胞開展體外細胞實驗。

siRNA-BDNF干擾效率的驗證

【參考文獻】：
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本文編號：3426975