建立了氣相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用法（GC-MS/MS）同時(shí)測(cè)定大腸桿菌三羧酸（TCA）循環(huán)中6種有機(jī)酸的方法。樣品經(jīng)細(xì)胞破壁處理、固相萃�。⊿PE）富集凈化,由硅烷化試劑N-（特丁基二甲基硅烷）-N-甲基三氟乙酰胺（MTBSTFA）衍生化后,利用GC-MS/MS多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式測(cè)定,外標(biāo)法定量。6種有機(jī)酸在20～10 000μg/L范圍內(nèi)線性良好,相關(guān)系數(shù)均大于0.99,加標(biāo)回收率為82.3%～100.4%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.3%～4.5%,方法檢出限為2.0～18μg/L。方法受基質(zhì)影響小,重現(xiàn)性好,適合于復(fù)雜生物基質(zhì)樣本中有機(jī)酸含量的測(cè)定。 

【文章來(lái)源】：化學(xué)試劑. 2020,42(04)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：5 頁(yè)

【部分圖文】：

6種有機(jī)酸衍生物在Scan模式下的總離子流圖

6種有機(jī)酸衍生物在MRM模式下的離子流圖

由于TCA循環(huán)代謝是在細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行的,因此需要對(duì)胞內(nèi)代謝物進(jìn)行提取。分別對(duì)比了液氮凍融法、超聲破碎法對(duì)細(xì)胞破碎及代謝物提取的效果,由于液氮凍融的方法,在實(shí)驗(yàn)時(shí)使細(xì)胞處于低溫環(huán)境,能更好的保護(hù)并提取細(xì)胞內(nèi)有機(jī)酸,因此在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中以液氮凍融法作為細(xì)胞破碎及代謝物提取的方法。為了能夠最大程度提取胞內(nèi)有機(jī)酸,隨后對(duì)液氮凍融法反復(fù)凍融的次數(shù)進(jìn)行考查。取同一發(fā)酵液經(jīng)過(guò)淬滅、洗滌后分成5批,每批做3個(gè)平行樣,分別進(jìn)1、2、3、4、5次液氮凍融破碎處理,然后按1.2.4方法衍生后上機(jī)分析,比較不同凍融次數(shù)下的代謝物提取量,以液氮凍融一次得到的代謝物有機(jī)酸的量作為對(duì)照,將經(jīng)過(guò)凍融2、3、4、5次所得到的代謝物的量與前者之比作為縱坐標(biāo),結(jié)果如圖3所示。結(jié)果表明,經(jīng)過(guò)4次凍融破碎后,其代謝物釋放量基本達(dá)到最大值,因此選擇液氮凍融法提取4次。2.2.2 大腸桿菌固相萃取條件的優(yōu)化

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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