目的:研究沙利度胺對體外定向分化培養(yǎng)的正常人紅系細胞γ-珠蛋白基因的誘導(dǎo)作用及調(diào)控機制,以進一步了解沙利度胺對紅系細胞γ-珠蛋白基因的相關(guān)作用。方法:1.采集經(jīng)粒細胞集落刺激因子（rhG-CSF）動員后的正常人骨髓液10mL,用淋巴細胞分離液密度梯度離心法獲得單個核細胞后,再經(jīng)磁珠分選CD34+造血干祖細胞,接種于本實驗室已建立的二階段體外液體紅系定向分化培養(yǎng)體系,促進CD34+造血干祖細胞定向向成熟紅細胞方向分化。用倒置顯微鏡觀察培養(yǎng)細胞的基本狀態(tài)。用Giemsa染色,顯微鏡下觀察細胞形態(tài)。誘導(dǎo)分化期間用流式細胞儀定期檢測紅細胞分化特異性標(biāo)志物CD235a和CD71的表達情況,以此來確定紅系細胞體外培養(yǎng)的順利進行。2.將終濃度設(shè)為50?mol/L、100?mol/L、200?mol/L、300?mol/L的沙利度胺（Thd）為實驗組,0?mol/L為陰性對照組（NC）,100?mol/L的羥基脲（HU）為陽性對照組,分別以不同藥物濃度作用于紅系細胞24h、48h、72h、96h后,采用CCK-8試劑盒檢測不同濃度以及不同時間作用條件下紅系細胞的存活率;采用實時熒光定量PCR（Real... 

【文章來源】：廣西醫(yī)科大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

細胞分化第1天、第4天、第7天、第9天、第12天、第15天的顯微鏡下的細胞形態(tài)

亦包括部分中幼紅細胞。培養(yǎng)至 8 天及以后，各個不同發(fā)育階段的紅系細胞同時出現(xiàn)在同一培養(yǎng)液中，其中以中幼紅細胞、晚幼紅細胞較多見，隨著分化天數(shù)的增加，培養(yǎng)液內(nèi)分化偏晚期的紅細胞多見（。見圖1-2、圖1-3）原始紅細胞 早幼紅細胞 中幼紅細胞 晚幼紅細胞 成熟紅細胞圖 1-2 細胞定向分化過程圖，經(jīng) Giemsa 染色，1000 倍視野下細胞形態(tài)（第 2-15 天）

沙利度胺對體外培養(yǎng)的人紅系細胞 γ-珠蛋白基因表達作用及調(diào)控機制的研究 2019 屆碩士研究生學(xué)4）、晚幼紅細胞細胞圓形或者橢圓形，核圓，約占整個細胞的 1/2，細胞核者偏位；染色質(zhì)凝集，濃染呈均勻的塊狀，沒有核仁；胞質(zhì)量更為呈淡紅色。5）、成熟紅細胞成熟紅細胞呈雙凹圓盤狀，中心顏色淺染，淺染區(qū)約占紅細的 1/3。2.流式細胞儀測定細胞 CD34+、CD235a+、CD71+表達情況2.1 磁珠分選后細胞 CD34+的表達情況。見圖 1-4

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3352116