目的構建上游刺激因子2（USF2）及其截短體的真核表達載體,鑒定USF2蛋白中抑制泛素連接酶Smurf1/2轉錄的功能區(qū)域。方法采用PCR技術擴增USF2及其兩個截短體USF2（1²35aa）、USF2（236³46aa）編碼基因,分別將其構建在pCMV-Myc重組載體上,轉染真核細胞后驗證其表達,Western blot及實時定量PCR確定USF2下調(diào)Smurf1/2轉錄水平的區(qū)域。結果成功地將USF2及其兩個截短體編碼基因構建至pCMV-Myc載體,并驗證其在真核細胞中的正確表達,Western Blot和實時定量PCR實驗結果顯示,USF2 C端236³46aa區(qū)域對Smurf1/2的轉錄水平有抑制效應。結論 USF2通過其C端236³46aa區(qū)域對Smurf1/2的轉錄產(chǎn)生抑制效應。 

【文章來源】：山東大學學報(醫(yī)學版). 2013,51(08)北大核心

【文章頁數(shù)】：4 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 實驗細胞及質粒
        1.1.2 主要試劑
    1.2 方法
        1.2.1 引物設計
        1.2.2 M yc-USF2、M yc-USF2 (1~235aa) 、M yc-USF2 (236~346aa) 真核表達載體的構建
        1.2.3 細胞培養(yǎng)及轉染
        1.2.4 Western blotting檢測
        1.2.5 實時定量PCR
2 結果
    2.1 M yc-USF2、M yc-USF2 (1~235aa) 、M yc-USF2 (236~346aa) 的真核載體構建
    2.2 USF2及其截短體在真核細胞內(nèi)的表達鑒定
    2.3 USF2及其截短體對Smurf1/2轉錄水平的影響
3 討論



本文編號：3349208