目的構(gòu)建上游刺激因子2（USF2）及其截短體的真核表達(dá)載體,鑒定USF2蛋白中抑制泛素連接酶Smurf1/2轉(zhuǎn)錄的功能區(qū)域。方法采用PCR技術(shù)擴(kuò)增USF2及其兩個(gè)截短體USF2（1²35aa）、USF2（236³46aa）編碼基因,分別將其構(gòu)建在pCMV-Myc重組載體上,轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞后驗(yàn)證其表達(dá),Western blot及實(shí)時(shí)定量PCR確定USF2下調(diào)Smurf1/2轉(zhuǎn)錄水平的區(qū)域。結(jié)果成功地將USF2及其兩個(gè)截短體編碼基因構(gòu)建至pCMV-Myc載體,并驗(yàn)證其在真核細(xì)胞中的正確表達(dá),Western Blot和實(shí)時(shí)定量PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,USF2 C端236³46aa區(qū)域?qū)murf1/2的轉(zhuǎn)錄水平有抑制效應(yīng)。結(jié)論 USF2通過(guò)其C端236³46aa區(qū)域?qū)murf1/2的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生抑制效應(yīng)。 

【文章來(lái)源】：山東大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2013,51(08)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：4 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞及質(zhì)粒
        1.1.2 主要試劑
    1.2 方法
        1.2.1 引物設(shè)計(jì)
        1.2.2 M yc-USF2、M yc-USF2 (1~235aa) 、M yc-USF2 (236~346aa) 真核表達(dá)載體的構(gòu)建
        1.2.3 細(xì)胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染
        1.2.4 Western blotting檢測(cè)
        1.2.5 實(shí)時(shí)定量PCR
2 結(jié)果
    2.1 M yc-USF2、M yc-USF2 (1~235aa) 、M yc-USF2 (236~346aa) 的真核載體構(gòu)建
    2.2 USF2及其截短體在真核細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)鑒定
    2.3 USF2及其截短體對(duì)Smurf1/2轉(zhuǎn)錄水平的影響
3 討論



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