目的:1.建立剛地弓形蟲profilin（TgPRF）蛋白的原核表達(dá)體系。2.制備兔抗TgPRF多克隆抗體,同時(shí)檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞及速殖子毒性。3.利用小鼠胚胎纖維細(xì)胞（BALB/C-3T3）建立弓形蟲速殖（RH-green fluorescent protein,RH-GFP）子體外增殖模型,評(píng)價(jià)TgPRF抗體對(duì)弓形蟲速殖子體外增殖的抑制作用以及對(duì)感染細(xì)胞生長(zhǎng)及凋亡的影響,為TgPRF疫苗的保護(hù)性研究提供理論支撐和實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。方法:小鼠腹腔傳代獲取弓形蟲RH株速殖子,提取弓形蟲速殖子總RNA并反轉(zhuǎn)錄為cDNA,以其為模板通過(guò)特異引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增TgPRF基因。PCR產(chǎn)物及pET-30a（+）載體經(jīng)NdeⅠ和XhoⅠ雙酶切后進(jìn)行連接,構(gòu)建pET-30a（+）-TgPRF重組質(zhì)粒。將pET-30a（+）-TgPRF轉(zhuǎn)化E.coli XL10-GOLD感受態(tài)細(xì)胞,篩選陽(yáng)性菌落經(jīng)PCR及測(cè)序鑒定,選取測(cè)序正確的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化E.coli BL21-（DE3）表達(dá)菌,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)并將表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行SDS-PAGE及Western blotting分析,利用Ni-NTA親和層析和陰離子柱純化蛋白后聯(lián)合佐劑免... 

【文章來(lái)源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁(yè)數(shù)】：63 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

弓形蟲總RNA的凝膠電泳檢測(cè)Fig.1GelelectrophoresisanalysisoftotalRNAofToxoplasmagondii

形蟲 cDNA 等量的水為模板作為任何條帶出現(xiàn)（圖 2）。圖 1 弓形蟲總 RNA 的凝膠電泳檢測(cè)rophoresis analysis of total RNA of To

文 PRF 重組質(zhì)粒鑒定結(jié)果，分別用 TgPRF 特異性引物和通用引物 作做為陰性對(duì)照進(jìn)行 PCR。用 TgPRF 特異粒的通用引物（T7 和 T7t）擴(kuò)增產(chǎn)物為 68經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳可見(jiàn)特異性引物擴(kuò)增條（泳道 3）亦可見(jiàn)與預(yù)期相符條帶(圖 3)。組質(zhì)粒樣品送公司測(cè)序，使用 DNAStar 7比對(duì)，結(jié)果顯示酶切位點(diǎn)正確，基因序列與


本文編號(hào)：3341448