目的:發(fā)育過程中的干細胞數(shù)目調(diào)控與組織穩(wěn)態(tài)平衡、癌癥、衰老等重大問題密切相關(guān)。果蠅腸道600個干細胞在蛹期先不對稱分裂,后各自對稱分裂,產(chǎn)生一對干細胞與一對內(nèi)分泌細胞,出蛹前達到1200個干細胞。干細胞不對稱分裂時,細胞極性蛋白Miranda（Mira）通過物理結(jié)合將內(nèi)分泌細胞分化因子Prospero（Pros）定位到底部子代細胞中;而內(nèi)分泌前體細胞對稱分裂時,Mira消失,Pros平均分配到兩個子代細胞。Mira決定細胞的分裂方式及其子代細胞的命運,因此Mira是決定干細胞數(shù)目的關(guān)鍵因子,我們通過在蛹期腸道干細胞譜系中過表達或敲除mira,來研究干細胞數(shù)目調(diào)控的分子機制。方法:（1）利用esg^ts在蛹期腸道干細胞中過表達Mira后統(tǒng)計腸道中干細胞及內(nèi)分泌細胞數(shù)目;（2）通過Mira-GFP、Pros以及細胞極性蛋白Bazooka（Baz）的染色揭示過表達Mira表型的內(nèi)在分子機制;（3）利用esg^ts在蛹期腸道干細胞中敲除mira后統(tǒng)計腸道中干細胞及內(nèi)分泌細胞數(shù)目;（4）利用MARCM克隆技術(shù)對過表達和敲除mira時干細胞譜系進行追蹤;（5... 

【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

果蠅蛹期腸道干細胞的分裂模式

華 中 科 技 大 學(xué) 碩 士 學(xué) 位 論 文EWT MARCM UAS-Mira MARCM96hAPFF 96hAPFesgts>GFP esgts>UAS-MiraA BC D0.00.51.01.52.02.5****n.see36h APF60h APFTime transfer to 30℃GFP Pros GFP Prosesgts>GFPesgts>UAS-Miraesgts>GFP esgts>UAS-MiraISC/eeratioNumberofcelsISC0100020003000

在對照組 esg-Gal4 中，ISC 不對稱分裂時，Pros 分布于底部的細胞膜，Baz 定位于頂部的細胞膜（圖 3F 和 F’），EMC 對稱分裂時，Pros 均勻分布于細胞質(zhì)中，Baz也定位于頂部的細胞膜（圖3G和G’）。而在實驗組esg>UAS-MiraGFP中，2nd 不對稱分裂時，MiraGFP 和 Pros 都分布于底部的細胞膜上，Baz 定位于頂部的細胞膜（圖 3H 和 H’），但 3rd 對稱分裂時，MiraGFP 和 Pros 都均勻分布于細胞質(zhì)中，Baz 定位到整個細胞膜上（圖 3I 和 I’）。這一結(jié)果表明，由于 Baz定位錯誤


本文編號：3321325