目的:探討鞭毛內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白74（IFT74）對(duì)雄性小鼠精子發(fā)生和生育能力的影響,為更加全面地了解男性生殖功能障礙提供一定的科學(xué)線索。方法:將成年的Ift74^flox/flox雌性小鼠與Stra8-iCre雄性小鼠雜交,建立Ift74基因條件敲除小鼠,通過(guò)常規(guī)PCR分析小鼠的基因型,篩選出Stra8-iCre⁺/Ift74^flox/flox雄性小鼠作為實(shí)驗(yàn)組,Stra8-iCre^-雄性小鼠作為對(duì)照組,收集各組小鼠的心臟、腦、脾、肺、肝、腎、肌肉、睪丸及附睪等組織,采用蛋白印跡法檢測(cè)在對(duì)照組小鼠各組織中IFT74蛋白的表達(dá)水平及睪丸組織中第一波精子發(fā)生各個(gè)階段IFT74蛋白的表達(dá)水平;采用免疫熒光染色檢測(cè)IFT74在實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組雄性小鼠睪丸組織生精細(xì)胞中的定位;采用HE染色檢測(cè)睪丸和附睪等組織中精子發(fā)生各個(gè)階段的形態(tài)學(xué)的變化,掃描電鏡觀察附睪中精子形態(tài)的變化,透射電鏡觀察小鼠睪丸組織超微結(jié)構(gòu)的改變;蛋白印跡檢測(cè)各組小鼠睪丸組織中IT20、IFT25、IFT27、IFT81、IFT88、IFT140、OD... 

【文章來(lái)源】：武漢科技大學(xué)湖北省

【文章頁(yè)數(shù)】：60 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 前言
第2章 材料
    2.1 主要試劑的配制
        2.1.1 組織固定液
        2.1.2 10%SDS溶液
        2.1.3 Lysis Buffer裂解液
        2.1.4 50×TAE電泳緩沖液
        2.1.5 RIPA Buffer裂解液
        2.1.6 1M Tris-Hcl溶液
        2.1.7 1.5M Tris-Hcl溶液
        2.1.8 10%AP溶液
        2.1.9 10×Running Buffer電泳緩沖液
        2.1.10 10×Transfer Buffer轉(zhuǎn)膜緩沖液
        2.1.11 10×TBS溶液
        2.1.12 10×TBS-T溶液
    2.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器
第3章 方法
    3.1 動(dòng)物倫理證明
    3.2 Ift74基因條件敲除雄性小鼠的產(chǎn)生
    3.3 小鼠基因型分析
    3.4 檢測(cè)IFT74蛋白在小鼠各組織中的表達(dá)水平
        3.4.1 小鼠組織蛋白提取
        3.4.2 小鼠組織蛋白濃度測(cè)定
        3.4.3 蛋白印跡（Western Blot，WB）檢測(cè)小鼠組織中蛋白的表達(dá)水平
    3.5 小鼠生殖力和繁殖力評(píng)估
    3.6 小鼠附睪精子計(jì)數(shù)
    3.7 小鼠附睪精子活力分析
    3.8 小鼠生精細(xì)胞分離和免疫熒光染色
    3.9 小鼠睪丸和附睪組織包埋和HE染色
    3.10 掃描電子顯微鏡（SEM）分析小鼠附睪精子形態(tài)
    3.11 透射電子顯微鏡（TEM）檢測(cè)小鼠睪丸組織的超微結(jié)構(gòu)
    3.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
第4章 結(jié)果
    4.1 小鼠基因型結(jié)果分析
    4.2 IFT74蛋白在小鼠組織中的表達(dá)和定位
        4.2.1 IFT74蛋白在小鼠組織中的表達(dá)
        4.2.2 IFT74蛋白在小鼠生精細(xì)胞中的定位
    4.3 Ift74基因條件敲除對(duì)雄性小鼠生殖能力的影響
        4.3.1 Ift74基因條件敲除小鼠模型中IFT74蛋白的表達(dá)水平
        4.3.2 Ift74基因條件敲除對(duì)雄性小鼠生育能力的影響
    4.4 Ift74基因條件敲除雄性小鼠精子形態(tài)和精子發(fā)生過(guò)程異常
        4.4.1 Ift74基因條件敲除雄性小鼠附睪精子數(shù)量和活力顯著降低
        4.4.2 Ift74基因條件敲除雄性小鼠附睪精子形態(tài)異常
        4.4.3 Ift74基因條件敲除雄性小鼠精子發(fā)生過(guò)程異常
        4.4.4 Ift74基因條件敲除雄性小鼠睪丸超微結(jié)構(gòu)異常
    4.5 IFT74對(duì)睪丸組織中其他IFT蛋白及鞭毛相關(guān)蛋白表達(dá)水平的影響
第5章 討論
第6章 結(jié)語(yǔ)與展望
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
附錄1 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文
附錄2 攻讀碩士學(xué)位期間參加的科研項(xiàng)目


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]不明原因不育癥患者精子超微結(jié)構(gòu)的研究[D]. 楊文穎.河北大學(xué) 2015



本文編號(hào)：3319463