哺乳動(dòng)物卵母細(xì)胞的正常發(fā)育是確保卵子成熟、受精以及胚胎發(fā)育的前提條件,是生命起始的物質(zhì)基礎(chǔ)。卵母細(xì)胞的成熟必須經(jīng)過一個(gè)精密而復(fù)雜的減數(shù)分裂過程,DNA復(fù)制一次,但是經(jīng)過兩次減數(shù)分裂,生成了一個(gè)單倍體配子和兩個(gè)極體。在這一系列過程中,涉及許多關(guān)鍵的生物學(xué)事件:微管的組裝及其動(dòng)態(tài)變化、動(dòng)粒-微管的連接、染色體的排列與分離等。只有當(dāng)所有事件完整無誤的完成后,才能保證遺傳物質(zhì)的精確分配。如果在此過程中任何一個(gè)事件出現(xiàn)錯(cuò)誤都將導(dǎo)致減數(shù)分裂失敗。Eg5作為驅(qū)動(dòng)蛋白的家族成員,參與了有絲分裂雙極紡錘體的形成和維持,在有絲分裂中起著重要的作用。但是Eg5是否能夠影響卵母細(xì)胞減數(shù)分裂過程以及作用機(jī)理尚不明確。由于豬卵母細(xì)胞在發(fā)育和生理上和人類更相似,本文旨在探究Eg5對豬卵母細(xì)胞減數(shù)分裂過程中的內(nèi)在調(diào)控機(jī)制,為卵母細(xì)胞發(fā)育成熟和質(zhì)量控制提供理論基礎(chǔ)。本實(shí)驗(yàn)選取豬卵母細(xì)胞作為研究對象,利用豬卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)體系,免疫熒光染色和免疫印跡等技術(shù)來探究Eg5特異性抑制劑monastrol影響豬卵母細(xì)胞質(zhì)量變化的規(guī)律,探索Eg5調(diào)控卵母細(xì)胞成熟的影響因素及作用機(jī)制。本實(shí)驗(yàn)主要研究結(jié)果如下:在本研究中首先通過體外添... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：102 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一部分 研究背景
    第一章 哺乳動(dòng)物卵母細(xì)胞的減數(shù)分裂成熟
        1. 卵母細(xì)胞減數(shù)分裂成熟過程
            1.1 生發(fā)泡破裂(GVBD)
            1.2 第一次減數(shù)分裂
            1.3 第二次減數(shù)分裂
        2. 減數(shù)分裂成熟過程中重要的生物學(xué)組件
            2.1 紡錘體
            2.2 微絲
            2.3 線粒體
            2.4 皮質(zhì)顆粒
            2.5 Ovastacin
    第二章 分子馬達(dá)
        1. 分子馬達(dá)
            1.1 肌球蛋白(Myosin)
            1.2 動(dòng)力蛋白(Dynein)
            1.3 驅(qū)動(dòng)蛋白(Kinesin)
第二部分 實(shí)驗(yàn)研究
    第三章 抑制Eg5活性阻斷卵母細(xì)胞發(fā)育和成熟分裂進(jìn)程
        1. 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1 抗體和試劑
            1.2 主要儀器和設(shè)備
            1.3 試劑的配制
        2. 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 豬卵母細(xì)胞的收集和體外成熟
            2.2 免疫熒光染色
            2.3 激光共聚焦顯微鏡觀察
            2.4 統(tǒng)計(jì)分析
        3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.1 抑制Eg5活性對豬卵母細(xì)胞發(fā)育的影響
            3.2 抑制Eg5活性對豬卵母細(xì)胞第一極體排出率的影響
        4. 討論
        5. 小結(jié)
    第四章 抑制Eg5活性對卵母細(xì)胞的核成熟的影響
        1. 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1 抗體
            1.2 試劑
            1.3 主要的儀器和設(shè)備
            1.4 試劑的配制
        2. 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 豬卵母細(xì)胞的收集和體外成熟
            2.2 紡錘體的免疫熒光染色
            2.3 微管乙�；拿庖邿晒馊旧�
            2.4 激光共聚焦顯微鏡觀察
            2.5 免疫蛋白印跡(Western Blot)
            2.6 統(tǒng)計(jì)分析
        3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.1 抑制Eg5活性影響卵母細(xì)胞的紡錘體以及染色體的形態(tài)
            3.2 抑制Eg5活性增加了卵母細(xì)胞紡錘體以及染色體的異常率
            3.3 抑制Eg5降低了豬卵母細(xì)胞微管穩(wěn)定性
        4. 討論
        5. 小結(jié)
    第五章 抑制Eg5活性對卵母細(xì)胞的胞質(zhì)成熟的影響
        1. 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1 抗體
            1.2 試劑
            1.3 主要的儀器和設(shè)備
            1.4 試劑的配制
        2. 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 豬卵母細(xì)胞收集和體外成熟
            2.2 免疫熒光染色和激光共聚焦顯微鏡觀察
            2.3 統(tǒng)計(jì)分析
        3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
            3.1 抑制Eg5活性影響卵母細(xì)胞中肌動(dòng)蛋白微絲的分布
            3.2 抑制Eg5活性影響卵母細(xì)胞中線粒體的完整性
            3.3 抑制Eg5對豬卵母細(xì)胞中皮質(zhì)顆粒的分布的影響
            3.4 抑制Eg5影響卵母細(xì)胞ovastacin的分布
        4. 討論
        5. 小結(jié)
全文結(jié)論
創(chuàng)新性
參考文獻(xiàn)
符號及縮略語表
在讀期間發(fā)表論文
致謝



本文編號：3199477