研究背景和目的:嚴重發(fā)熱伴血小板減少綜合征病毒（SFTSV）,感染后導致嚴重發(fā)熱伴血小板減少綜合征（SFTS）,死亡率較高。目前其致病機制尚不明確,臨床以對癥治療為主,藥物研發(fā)進展緩慢。干擾素（interferon,IFN）介導的固有免疫應答是抵抗病原體入侵的首要防線之一。干擾素刺激基因（IFN-stimulatedgenes,ISGs）是干擾素信號通路激活后的最終效應分子,發(fā)揮抗病毒和/或免疫調(diào)節(jié)作用,干擾素誘導的四肽重復蛋白3（IFIT3）就是其中之一。IFIT3在登革病毒、水泡口炎病毒等多種病毒感染中發(fā)揮著抗病毒作用;在SFTSV感染的單核細胞中IFIT3表達顯著增加。這些數(shù)據(jù)提示,IFIT3與病毒感染關系密切,但其對SFTSV的作用尚無相關報道,具體機制也有待進一步研究。本研究的目的在于研究在體外培養(yǎng)體系中,IFIT3對SFTSV復制的影響并初步探究其作用機制。研究方法:1.通過轉染質(zhì)�；騭iRNA分別上調(diào)或下調(diào)A549細胞中IFIT3的表達,real-time PCR及Western Blot等方法檢測IFIT3的表達及SFTSV復制情況;2.通過轉染質(zhì)粒或siRNA調(diào)節(jié)A5... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
一、研究背景
    1.嚴重發(fā)熱伴血小板減少綜合征病毒
        1.1.SFTSV病原學
        1.2.SFTSV的流行病學,臨床癥狀和診斷
        1.3.SFTSV的傳播途徑
        1.4.SFTSV的治療與疫苗研究
    2.干擾素信號通路與IFIT3
        2.1.干擾素信號通路
        2.2.干擾素誘導的四肽重復蛋白3
        2.3.SFTSV感染與固有免疫
    3.研究目的及意義
        3.1.研究目的
        3.2.研究意義
    4.技術路線圖
        4.1.IFIT3高表達質(zhì)粒的構建
        4.2.IFIT3對SFTSV及IFNβ抗病毒作用的影響
        4.3.IFIT3對JAK/STAT信號通路的影響
二、實驗材料
    1.實驗儀器、試劑與耗材
    2.菌株細胞和培養(yǎng)基
    3.常用質(zhì)粒及其載體
    4.常用熒光定量PCR引物
    5.常用試劑及配制方法
三、實驗方法
    1.細胞培養(yǎng)
    2.SFTSV感染A549細胞
    3.細胞內(nèi)總RNA的提取
    4.逆轉錄PCR
    5.熒光定量PCR
    6.干擾素α/β刺激A549細胞
    7.利用逆轉錄所得cDNA構建IFIT3表達質(zhì)粒
    8.大提質(zhì)粒
    9.細胞轉染
    10.提取細胞總蛋白
    11.BCA法測蛋白濃度
    12.蛋白質(zhì)免疫印跡
    13.雙熒光報告基因實驗
    14.統(tǒng)計學分析
四、實驗結果
    1.SFTSV感染細胞
    2.SFTSV感染誘導IFIT3表達增加
    3.高表達IFIT3抑制SFTSV復制
        3.1.在A549細胞中Ⅰ型干擾素誘導IFIT3表達
        3.2.成功構建IFIT3-pcDNA3.1-3×tag高表達質(zhì)粒
        3.3.IFIT3-pcDNA3.1-3×tag質(zhì)粒在293T和A549細胞中成功表達
    4.IFIT3對SFTSV復制的影響
        4.1.高表達IFIT3質(zhì)粒可以抑制SFTSV的復制
        4.2.敲低IFIT3的表達促進SFTSV的復制
    5.IFIT3可以調(diào)節(jié)Ⅰ型干擾素的產(chǎn)生
        5.1.高表達IFIT3可以促進IFNβ的產(chǎn)生
        5.2.敲低IFIT3的表達削弱Ⅰ型干擾素的產(chǎn)生
    6.IFIT3調(diào)節(jié)JAK/STAT信號通路
        6.1.IFIT3調(diào)節(jié)STAT1磷酸化
        6.2.IFIT3可以調(diào)節(jié)ISRE的活性
        6.3.IFIT3調(diào)節(jié)ISGs的表達
    7.過表達IFIT3協(xié)同促進IFNβ對SFTSV的抑制作用
        7.1.外源性Ⅰ型干擾素抑制SFTSV復制
        7.2.高表達IFIT3可以增強IFNβ對SFTSV的抑制作用
        7.3.高表達IFIT3可以增強IFNβ對ISGs的促進作用
    8.高表達IFIT3對TLR3,RIG-Ⅰ及MDA5的影響
五、討論
六、結論
參考文獻
附錄
文獻綜述 嚴重發(fā)熱伴血小板減少綜合征病毒（SFTSV)在輸血安全中的研究進展
    參考文獻
個人簡歷
致謝


【參考文獻】：
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本文編號：3180631