目的明確miRNA-26b（miR-26b）對小鼠胚胎干細(xì)胞（mESCs）多能性的調(diào)控作用。方法實時熒光定量PCR檢測miR-26簇前體在mESCs和小鼠胚胎成纖維細(xì)胞（MEF）中的表達(dá)。實時熒光定量PCR檢測胚狀體（EB）形成過程中成熟miR-26b的表達(dá)。CCK-8方法檢測miR-26b對mESCs增殖能力的影響。流式細(xì)胞術(shù)測定miR-26b對mESCs細(xì)胞周期與凋亡的影響。使用堿性磷酸酶染色試劑盒檢測miR-26b對mESCs中堿性磷酸酶活性的影響。實時熒光定量PCR檢測miR-26b對mESCs中多能性轉(zhuǎn)錄因子（Oct4、Sox2和Nanog）mRNA表達(dá)的影響。使用蛋白質(zhì)印跡法檢測miR-26b對mESCs中3個關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子的蛋白表達(dá)影響。用體外模型觀察轉(zhuǎn)染pcDNA-pre-miR-26b對mESCs形態(tài)的影響。結(jié)果 mESCs中,miR-26b的前體在miR-26簇群表達(dá)最高。MEF中所有miR-26前體均上調(diào),其中pre-miR-26b上調(diào)幅度最大（上調(diào)約10倍）。成熟的miR-26b在EB形成過程中從第2天到第6天明顯上調(diào),并且成熟miR-26b在MEF中的表達(dá)水平明... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2020,55(07)北大核心

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 藥物與試劑
        1.1.2 主要實驗儀器
    1.2 方法
        1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)和分化
        1.2.2 miRNA過表達(dá)
        1.2.3 胚狀體(embryoid bodies, EB)的形成及誘導(dǎo)分化
        1.2.4 RNA提取、cDNA合成及實時定量PCR
        1.2.5 增殖和細(xì)胞周期分析
        1.2.6 凋亡試驗
        1.2.7 堿性磷酸酶染色
        1.2.8 蛋白免疫印跡法
    1.3 統(tǒng)計學(xué)處理
2 結(jié)果
    2.1 mESCs分化過程中miR-26b的內(nèi)源性表達(dá)
    2.2 miR-26b對mESCs增殖的作用
    2.3 miR-26b對mESCs自我更新的作用
    2.4 miR-26b對mESCs分化的作用
3 討論



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