本文選題：過(guò)敏　切入點(diǎn)：重組乳酸菌　出處：《江南大學(xué)》2015年博士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：過(guò)敏,指已免疫的機(jī)體再次暴露于相同過(guò)敏原時(shí)所產(chǎn)生的功能紊亂反應(yīng)。過(guò)敏原種類(lèi)極多,其中,塵螨誘發(fā)的過(guò)敏性疾病是世界范圍內(nèi)最為常見(jiàn)的一類(lèi)疾病。臨床數(shù)據(jù)顯示超過(guò)80%的塵螨過(guò)敏患者對(duì)過(guò)敏原Der p2產(chǎn)生過(guò)敏反應(yīng)。目前,對(duì)于過(guò)敏的預(yù)防及治療尚無(wú)有效的手段,避免接觸是現(xiàn)行的最為主要的控制過(guò)敏的方式,但無(wú)法從根本上消除過(guò)敏的威脅。益生菌療法被認(rèn)為是一種極具潛力的治療方式,但其臨床效果與人們的預(yù)期之間存在一定的差距。研究者認(rèn)為通過(guò)對(duì)益生菌進(jìn)行一定的分子改造可以提高益生菌的治療效果。本文通過(guò)對(duì)重組乳酸菌的研究,尋求一種預(yù)防及治療塵螨過(guò)敏的有效途徑。本文的主要研究?jī)?nèi)容如下:1.外源蛋白在重組乳酸菌中的表達(dá)部位可能影響重組菌株在體內(nèi)的免疫效果。為確定最合適的表達(dá)方式,本研究將Der p2在重組乳酸乳球菌的不同部位表達(dá),并對(duì)其在體內(nèi)的免疫效果進(jìn)行分析。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明三種不同的重組乳酸菌都可以抑制過(guò)敏小鼠肺部組織中Th2細(xì)胞因子IL-4和IL-5的表達(dá),降低炎癥細(xì)胞在肺部組織中的浸潤(rùn)反應(yīng),緩解過(guò)敏原誘發(fā)的肺部炎癥反應(yīng)。此外,重組乳酸菌通過(guò)調(diào)節(jié)過(guò)敏小鼠體內(nèi)的細(xì)胞免疫反應(yīng),增加特異性Ig G2a的表達(dá),抑制特異性Ig E的產(chǎn)生。重組乳酸菌對(duì)過(guò)敏反應(yīng)的抑制作用可能與其誘導(dǎo)增加的腸系膜淋巴結(jié)中Tregs的表達(dá)有關(guān)。不同的重組乳酸菌在體內(nèi)具有相似的免疫效果,表明Der p2在重組乳酸菌中的表達(dá)部位并不會(huì)影響重組乳酸菌在體內(nèi)的免疫效果。2.過(guò)敏原Der p2用于塵螨過(guò)敏治療或預(yù)防時(shí),無(wú)法避免Ig E介導(dǎo)的副反應(yīng)的發(fā)生,但破壞過(guò)敏原的空間結(jié)構(gòu)可以降低或消除其與Ig E的結(jié)合能力。本研究基于Der p2基因序列,通過(guò)改變其線性序列和敲除與蛋白折疊有關(guān)的位點(diǎn)可以得到一段新的基因,表達(dá)包含Der p2大部分氨基酸序列但空間結(jié)構(gòu)又與Der p2不同的衍生物蛋白DM。體外研究證實(shí)DM消除了與塵螨過(guò)敏患者體內(nèi)Der p2特異性Ig E的結(jié)合能力,保留了與T細(xì)胞反應(yīng)的能力。為驗(yàn)證DM的免疫特性,DM基因被轉(zhuǎn)入重組乳酸菌LL-DM中分泌表達(dá)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明重組乳酸菌LL-DM可以抑制小鼠體內(nèi)過(guò)敏反應(yīng)的發(fā)生,其抑制效果及保護(hù)機(jī)制與表達(dá)Der p2的重組乳酸菌相比并沒(méi)有顯著性差異。3.相比大分子過(guò)敏原衍生物,過(guò)敏原小分子片段不僅可以避免Ig E介導(dǎo)的副反應(yīng)的發(fā)生,還可以減少激活的效應(yīng)細(xì)胞引發(fā)的不良反應(yīng)。本研究通過(guò)對(duì)Der p2氨基酸序列的分析,得到5段含有Der p2主要T細(xì)胞位點(diǎn)的多肽片段。體外研究證實(shí)Der p2多肽片段消除了與特異性Ig E的結(jié)合能力;但與DM不同的是Der p2多肽片段與T細(xì)胞反應(yīng)的能力明顯降低。為驗(yàn)證Der p2多肽片段的免疫特性,多肽片段基因被分別轉(zhuǎn)入重組乳酸菌中分泌表達(dá)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明重組乳酸菌表達(dá)的多肽片段混合物可以有效地抑制小鼠體內(nèi)過(guò)敏反應(yīng)的發(fā)生,其保護(hù)機(jī)制與表達(dá)DM的重組乳酸菌基本相似,但其效果要稍弱于DM�？紤]到過(guò)敏治療的長(zhǎng)期性,Der p2多肽片段混合物比DM更具治療潛力。4.目前的研究證實(shí)表達(dá)外源蛋白的乳酸乳球菌并不是一株具有明顯抗過(guò)敏特性的益生菌,因而可能影響重組乳酸菌在體內(nèi)的抗過(guò)敏效果。為得到具有抗過(guò)敏特性的菌株與重組乳酸菌復(fù)配使用,本研究通過(guò)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)對(duì)不同來(lái)源、不同種屬的乳酸菌進(jìn)行初篩。結(jié)果表明相比其他菌株,S.thermophilus CCFM218(ST218)可以誘導(dǎo)IL-10的表達(dá)抑制IL-4的產(chǎn)生,是一株具有潛在抗過(guò)敏特性的益生菌。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)ST218雖不能抑制過(guò)敏小鼠體內(nèi)特異性Ig E的表達(dá),但可以增加特異性Ig G2a的產(chǎn)生緩解過(guò)敏反應(yīng)。此外,ST218可以抑制肺部組織中Th2細(xì)胞因子的表達(dá)降低炎癥細(xì)胞在肺部組織中的浸潤(rùn)反應(yīng),緩解過(guò)敏原引起的肺部炎癥反應(yīng)。ST218對(duì)過(guò)敏反應(yīng)的抑制作用與其對(duì)腸道菌群及粘膜免疫的調(diào)節(jié)作用密切相關(guān)。5.為分析ST218對(duì)重組乳酸菌抗過(guò)敏效果的影響,本研究對(duì)兩者混合物在小鼠體內(nèi)對(duì)過(guò)敏反應(yīng)的抑制效果進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明ST218明顯增強(qiáng)了重組乳酸菌對(duì)特異性Ig E表達(dá)的抑制作用,這與ST218對(duì)腸系膜淋巴結(jié)中Tregs的調(diào)控表達(dá)有關(guān)。肺部炎癥因子的分析表明ST218和重組乳酸菌的混合物可以降低過(guò)敏原誘發(fā)的炎癥反應(yīng),但與重組乳酸菌處理組相比并沒(méi)有顯著性差異,這可能與目前的炎癥水平較低有關(guān)。綜上所述,本研究通過(guò)對(duì)蛋白表達(dá)部位、蛋白結(jié)構(gòu)及表達(dá)載體等影響重組乳酸菌在體內(nèi)免疫效果相關(guān)因素的研究,探究一種可以安全有效預(yù)防塵螨過(guò)敏的有效方式,為未來(lái)重組乳酸菌疫苗在臨床及生產(chǎn)中的實(shí)際應(yīng)用提供重要的理論依據(jù)和參考價(jià)值。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：江南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R392

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1607875