本文關(guān)鍵詞：巨噬細(xì)胞微粒通過激活MAPK信號通路誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞產(chǎn)生IL-8

  更多相關(guān)文章： 香煙煙霧提取物 巨噬細(xì)胞微粒 絲裂原活化蛋白激酶 IL-8

【摘要】：目的:巨噬細(xì)胞微粒是介導(dǎo)慢阻肺、糖尿病、慢性腎病等病發(fā)病的重要病因。目前研究已得知,巨噬細(xì)胞微粒引起的過度炎癥反應(yīng)導(dǎo)致的免疫損傷是其致病的主要原因,但是巨噬細(xì)胞微粒引起過度炎癥反應(yīng)的具體發(fā)病機(jī)制尚不明確。本實(shí)驗(yàn)研究旨在探討巨噬細(xì)胞微粒能否誘導(dǎo)人單核細(xì)胞(THP-1)產(chǎn)生炎癥因子IL-8,以及絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)信號通路在巨噬細(xì)胞微粒誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞產(chǎn)生炎癥因子IL-8的過程中的作用,進(jìn)一步探討巨噬細(xì)胞微粒的致病原理。方法:參照Nakamura和Yang SR的方法,用注射器連續(xù)抽吸收集2支完全燃燒的香煙的煙霧,隨后將煙霧慢慢注射到不含血清的20ml培養(yǎng)基中,得到濃度為10%的香煙煙霧提取物(cigarette smoke extract,CSE)溶液。THP-1細(xì)胞用含佛波酯(PMA)的培養(yǎng)基處理24h后再用含2.5%的CSE的培養(yǎng)基刺激20h,隨后收集微粒并作流式細(xì)胞術(shù)檢測。分別用103、104、105、106/ml的巨噬細(xì)胞微粒處理已被用含佛波酯(PMA)的培養(yǎng)基刺激24h的THP-1細(xì)胞,分別在0h、3h、6h、12h、24h停止刺激。收集細(xì)胞后ELISA方法檢測IL-8。105/ml的巨噬細(xì)胞微粒處理已被用含PMA的培養(yǎng)基刺激24h的THP-1細(xì)胞,分別在0min,15min,30min,60min停止刺激。Western blotting方法分別檢測ERK1/2、JNK、p38的磷酸化程度。分別用1μM、10μM、30μM的p38特異性抑制劑SB203580、JNK特異性抑制劑SP600125、ERK1/2特異性抑制劑PD98059預(yù)處理已被PMA刺激的THP-1細(xì)胞,30min后再用105/ml巨噬細(xì)胞微粒刺激THP-1細(xì)胞12h,并用ELISA方法分析不同抑制劑對IL-8產(chǎn)生的影響。結(jié)果:(1)用含2.5%的CSE的培養(yǎng)基培養(yǎng)經(jīng)PMA處理的THP-1細(xì)胞20h后,能明顯誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞產(chǎn)生巨噬細(xì)胞微粒。(2)ELISA結(jié)果表明,不同濃度組的巨噬細(xì)胞微粒都能明顯刺激THP-1細(xì)胞產(chǎn)生IL-8。細(xì)胞上清中IL-8含量隨微粒處理濃度的增加表現(xiàn)為逐漸升高的趨勢,當(dāng)微粒濃度為105/ml時達(dá)到最高。在同一濃度組間,隨著處理時間的遞增,IL-8的含量逐漸升高,在12h時IL-8產(chǎn)生最多,隨后下降。(3)WB圖片表明,巨噬細(xì)胞微粒處理THP-1細(xì)胞后p38/MAPK、JNK和ERK1/2/MAPK的磷酸化水平都較對照組升高,并且隨著巨噬細(xì)胞微粒處理時間的遞增p38/MAPK、JNK和ERK1/2/MAPK的磷酸化水平逐漸升高,三條通路的磷酸化程度基本都在處理THP-1細(xì)胞30min后升為最高。(4)ELISA檢測結(jié)果表明:分別用1μM、10μM、30μM的p38特異性抑制劑SB203580、JNK特異性抑制劑SP600125、ERK1/2特異性抑制劑PD98059預(yù)處理THP-1細(xì)胞后,巨噬細(xì)胞微粒刺激THP-1細(xì)胞產(chǎn)生的IL-8含量都較未使用時降低,并且與抑制劑的濃度呈劑量依賴性。當(dāng)三種特異性抑制劑濃度為30μM時,IL-8含量分別降到31.3%、46.1%和51.4%。結(jié)論:(1)香煙煙霧可誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞產(chǎn)生巨噬細(xì)胞微粒;(2)巨噬細(xì)胞微粒可誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞產(chǎn)生前炎癥因子IL-8;(3)巨噬細(xì)胞微�？杉せ頔RK1/2/MAPK、JNK/MAPK和p38/MAPK通路,活化的ERK1/2/MAPK、JNK/MAPK和p38/MAPK通路可能與巨噬細(xì)胞微粒誘導(dǎo)前炎癥細(xì)胞因子IL-8的產(chǎn)生有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：香煙煙霧提取物 巨噬細(xì)胞微粒 絲裂原活化蛋白激酶 IL-8
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R563.8
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• ABSTRACT7-12
• 主要中英文縮寫12-14
• 第一章 前言14-18
• 第二章 實(shí)驗(yàn)材料18-22
• 2.1 實(shí)驗(yàn)主要儀器18
• 2.2 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞18
• 2.3.實(shí)驗(yàn)試劑及溶液配制18-22
• 2.3.1 主要實(shí)驗(yàn)試劑配置18-19
• 2.3.2 主要實(shí)驗(yàn)溶液配制19-22
• 第三章 實(shí)驗(yàn)方法22-30
• 3.1 人單核細(xì)胞（THP-1 細(xì)胞）培養(yǎng)22-23
• 3.1.1 THP-1 細(xì)胞培養(yǎng)22
• 3.1.2 細(xì)胞計(jì)數(shù)22
• 3.1.3 細(xì)胞傳代22
• 3.1.4 細(xì)胞凍存22-23
• 3.1.5 細(xì)胞復(fù)蘇23
• 3.2 巨噬細(xì)胞微粒制備和分離23-24
• 3.2.1 香煙煙霧CSE原液制備23
• 3.2.2 佛波酯活化處理23
• 3.2.3 香煙煙霧提取物處理 THP-1 細(xì)胞23-24
• 3.2.4 巨噬細(xì)胞微粒收集24
• 3.3 探討巨噬細(xì)胞微粒對THP-1 細(xì)胞的影響24-28
• 3.3.1 巨噬細(xì)胞微粒作用組24-28
• 3.3.2 MAPK特異性抑制劑作用組28
• 3.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析28-30
• 第四章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果30-39
• 4.1 100nM佛波酯誘導(dǎo)THP-1 細(xì)胞活化貼壁觀察30
• 4.2 CSE處理活化的THP-1 細(xì)胞后細(xì)胞形態(tài)的變化30-31
• 4.3 酶聯(lián)免疫分析（ELISA）檢測巨噬細(xì)胞微粒誘導(dǎo)THP-1 細(xì)胞產(chǎn)生IL-8 的情況31-33
• 4.4 western blotting檢測巨噬細(xì)胞微粒處理THP-1 細(xì)胞后對MAPK活化的影響33-36
• 4.5 酶聯(lián)免疫分析（ELISA）檢測抑制劑處理后，，巨噬細(xì)胞微粒誘導(dǎo)THP-1 細(xì)胞產(chǎn)生IL-8 的情況36-39
• 第五章 討論39-43
• 第六章 結(jié)論43-45
• 參考文獻(xiàn)45-49
• 研究生期間發(fā)表的論文49-51
• 致謝51

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本文編號：994826