本文關鍵詞：巨噬細胞微粒通過激活MAPK信號通路誘導THP-1細胞產(chǎn)生IL-8

  更多相關文章： 香煙煙霧提取物 巨噬細胞微粒 絲裂原活化蛋白激酶 IL-8

【摘要】：目的:巨噬細胞微粒是介導慢阻肺、糖尿病、慢性腎病等病發(fā)病的重要病因。目前研究已得知,巨噬細胞微粒引起的過度炎癥反應導致的免疫損傷是其致病的主要原因,但是巨噬細胞微粒引起過度炎癥反應的具體發(fā)病機制尚不明確。本實驗研究旨在探討巨噬細胞微粒能否誘導人單核細胞(THP-1)產(chǎn)生炎癥因子IL-8,以及絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)信號通路在巨噬細胞微粒誘導THP-1細胞產(chǎn)生炎癥因子IL-8的過程中的作用,進一步探討巨噬細胞微粒的致病原理。方法:參照Nakamura和Yang SR的方法,用注射器連續(xù)抽吸收集2支完全燃燒的香煙的煙霧,隨后將煙霧慢慢注射到不含血清的20ml培養(yǎng)基中,得到濃度為10%的香煙煙霧提取物(cigarette smoke extract,CSE)溶液。THP-1細胞用含佛波酯(PMA)的培養(yǎng)基處理24h后再用含2.5%的CSE的培養(yǎng)基刺激20h,隨后收集微粒并作流式細胞術檢測。分別用103、104、105、106/ml的巨噬細胞微粒處理已被用含佛波酯(PMA)的培養(yǎng)基刺激24h的THP-1細胞,分別在0h、3h、6h、12h、24h停止刺激。收集細胞后ELISA方法檢測IL-8。105/ml的巨噬細胞微粒處理已被用含PMA的培養(yǎng)基刺激24h的THP-1細胞,分別在0min,15min,30min,60min停止刺激。Western blotting方法分別檢測ERK1/2、JNK、p38的磷酸化程度。分別用1μM、10μM、30μM的p38特異性抑制劑SB203580、JNK特異性抑制劑SP600125、ERK1/2特異性抑制劑PD98059預處理已被PMA刺激的THP-1細胞,30min后再用105/ml巨噬細胞微粒刺激THP-1細胞12h,并用ELISA方法分析不同抑制劑對IL-8產(chǎn)生的影響。結果:(1)用含2.5%的CSE的培養(yǎng)基培養(yǎng)經(jīng)PMA處理的THP-1細胞20h后,能明顯誘導THP-1細胞產(chǎn)生巨噬細胞微粒。(2)ELISA結果表明,不同濃度組的巨噬細胞微粒都能明顯刺激THP-1細胞產(chǎn)生IL-8。細胞上清中IL-8含量隨微粒處理濃度的增加表現(xiàn)為逐漸升高的趨勢,當微粒濃度為105/ml時達到最高。在同一濃度組間,隨著處理時間的遞增,IL-8的含量逐漸升高,在12h時IL-8產(chǎn)生最多,隨后下降。(3)WB圖片表明,巨噬細胞微粒處理THP-1細胞后p38/MAPK、JNK和ERK1/2/MAPK的磷酸化水平都較對照組升高,并且隨著巨噬細胞微粒處理時間的遞增p38/MAPK、JNK和ERK1/2/MAPK的磷酸化水平逐漸升高,三條通路的磷酸化程度基本都在處理THP-1細胞30min后升為最高。(4)ELISA檢測結果表明:分別用1μM、10μM、30μM的p38特異性抑制劑SB203580、JNK特異性抑制劑SP600125、ERK1/2特異性抑制劑PD98059預處理THP-1細胞后,巨噬細胞微粒刺激THP-1細胞產(chǎn)生的IL-8含量都較未使用時降低,并且與抑制劑的濃度呈劑量依賴性。當三種特異性抑制劑濃度為30μM時,IL-8含量分別降到31.3%、46.1%和51.4%。結論:(1)香煙煙霧可誘導THP-1細胞產(chǎn)生巨噬細胞微粒;(2)巨噬細胞微粒可誘導THP-1細胞產(chǎn)生前炎癥因子IL-8;(3)巨噬細胞微�？杉せ頔RK1/2/MAPK、JNK/MAPK和p38/MAPK通路,活化的ERK1/2/MAPK、JNK/MAPK和p38/MAPK通路可能與巨噬細胞微粒誘導前炎癥細胞因子IL-8的產(chǎn)生有關。
【關鍵詞】：香煙煙霧提取物 巨噬細胞微粒 絲裂原活化蛋白激酶 IL-8
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R563.8
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• ABSTRACT7-12
• 主要中英文縮寫12-14
• 第一章 前言14-18
• 第二章 實驗材料18-22
• 2.1 實驗主要儀器18
• 2.2 實驗細胞18
• 2.3.實驗試劑及溶液配制18-22
• 2.3.1 主要實驗試劑配置18-19
• 2.3.2 主要實驗溶液配制19-22
• 第三章 實驗方法22-30
• 3.1 人單核細胞（THP-1 細胞）培養(yǎng)22-23
• 3.1.1 THP-1 細胞培養(yǎng)22
• 3.1.2 細胞計數(shù)22
• 3.1.3 細胞傳代22
• 3.1.4 細胞凍存22-23
• 3.1.5 細胞復蘇23
• 3.2 巨噬細胞微粒制備和分離23-24
• 3.2.1 香煙煙霧CSE原液制備23
• 3.2.2 佛波酯活化處理23
• 3.2.3 香煙煙霧提取物處理 THP-1 細胞23-24
• 3.2.4 巨噬細胞微粒收集24
• 3.3 探討巨噬細胞微粒對THP-1 細胞的影響24-28
• 3.3.1 巨噬細胞微粒作用組24-28
• 3.3.2 MAPK特異性抑制劑作用組28
• 3.4 統(tǒng)計學分析28-30
• 第四章 實驗結果30-39
• 4.1 100nM佛波酯誘導THP-1 細胞活化貼壁觀察30
• 4.2 CSE處理活化的THP-1 細胞后細胞形態(tài)的變化30-31
• 4.3 酶聯(lián)免疫分析（ELISA）檢測巨噬細胞微粒誘導THP-1 細胞產(chǎn)生IL-8 的情況31-33
• 4.4 western blotting檢測巨噬細胞微粒處理THP-1 細胞后對MAPK活化的影響33-36
• 4.5 酶聯(lián)免疫分析（ELISA）檢測抑制劑處理后，，巨噬細胞微粒誘導THP-1 細胞產(chǎn)生IL-8 的情況36-39
• 第五章 討論39-43
• 第六章 結論43-45
• 參考文獻45-49
• 研究生期間發(fā)表的論文49-51
• 致謝51

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1 ;豚鼠巨噬細胞經(jīng)P_(204)處理后的抗石英細胞毒作用[J];國外醫(yī)學參考資料(衛(wèi)生學分冊);1976年04期

2 鄧俠進;;巨噬細胞的抗癌作用[J];遵義醫(yī)學院學報;1979年02期

3 陸天才;;疾病對肺巨噬細胞的影響[J];煤礦醫(yī)學;1982年01期

4 郭瑞清;祝彼得;;一種分離巨噬細胞的簡單方法[J];濱州醫(yī)學院學報;1990年02期

5 謝志堅;巨噬細胞異質(zhì)性[J];醫(yī)學綜述;2001年06期

6 饒艷;運動及神經(jīng)內(nèi)分泌對巨噬細胞功能的調(diào)節(jié)[J];體育與科學;2002年05期

7 朱金元;;吸煙對肺巨噬細胞的影響[J];浙江醫(yī)學教育;2003年01期

8 張俊峰;過氧化物酶體增殖物激活受體與單核/巨噬細胞系[J];醫(yī)學綜述;2004年03期

9 韋錦學;顧軍;;巨噬細胞的激活誘導死亡[J];生命科學;2006年02期

10 李曉曦;郭寧;曹雪濤;;腫瘤相關巨噬細胞促進腫瘤生長與轉(zhuǎn)移的研究現(xiàn)狀[J];中國腫瘤生物治療雜志;2008年01期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 史玉玲;王又明;豐美福;;巨噬細胞激活作用的研究[A];中國細胞生物學學會第五次會議論文摘要匯編[C];1992年

2 吳國明;周輝;;巨噬細胞和創(chuàng)傷纖維化[A];2009年浙江省骨科學學術年會論文匯編[C];2009年

3 李奇;王海杰;;透明質(zhì)酸對于淋巴結巨噬細胞運動的影響[A];解剖學雜志——中國解剖學會2002年年會文摘匯編[C];2002年

4 劉革修;歐大明;劉軍花;黃紅林;廖端芳;;丙丁酚在體外能抑制巨噬細胞脂質(zhì)氧化介導的低密度脂蛋白氧化并調(diào)節(jié)氧化巨噬細胞的分泌功能[A];面向21世紀的科技進步與社會經(jīng)濟發(fā)展（下冊）[C];1999年

5 葉金善;楊麗霞;郭瑞威;;環(huán)氧化酶-2/前列腺素E_2在血管緊張素Ⅱ刺激巨噬細胞表達細胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導因子中的作用[A];第十三次全國心血管病學術會議論文集[C];2011年

6 秦帥;陳希;孔德明;;構建由綠色熒光標記巨噬細胞的轉(zhuǎn)基因斑馬魚系[A];貴州省中西醫(yī)結合內(nèi)分泌代謝學術會論文匯編[C];2012年

7 武劍華;徐惠綿;;腫瘤相關巨噬細胞在胃癌中的相關研究[A];第9屆全國胃癌學術會議暨第二屆陽光長城腫瘤學術會議論文匯編[C];2014年

8 何軍;;血凝素樣氧化型低密度脂蛋白受體升高巨噬細胞內(nèi)膽固醇水平[A];中華醫(yī)學會第11次心血管病學術會議論文摘要集[C];2009年

9 宋盛;周非凡;邢達;;PDT誘導的凋亡細胞對巨噬細胞NO合成的影響[A];第七屆全國光生物學學術會議論文摘要集[C];2010年

10 張磊;朱建華;黃元偉;姚航平;;血管緊張素Ⅱ?qū)奘杉毎?THP-1重細胞)凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體表達的影響[A];浙江省免疫學會第五次學術研討會論文匯編[C];2004年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 通訊員 李靜 記者 胡德榮;惡性腫瘤巨噬細胞未必皆“惡人”[N];健康報;2014年

2 蘭克;以嘗試用巨噬細胞治癱瘓[N];科技日報;2000年

3 薛佳;免疫系統(tǒng)——人體的“衛(wèi)士”[N];保健時報;2009年

4 記者 胡德榮;鐵泵蛋白“維穩(wěn)”鐵代謝作用首次闡明[N];健康報;2011年

5 侯嘉 何新鄉(xiāng);硒的神奇功能[N];中國食品質(zhì)量報;2003年

6 唐穎 倪兵 陳代杰;巨噬細胞泡沫化抑制劑研究快步進行[N];中國醫(yī)藥報;2006年

7 劉元江;新發(fā)現(xiàn)解釋腫瘤為何易成“漏網(wǎng)之魚”[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2007年

8 本報記者 侯嘉 通訊員 何新鄉(xiāng);今天你補硒了嗎[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2003年

9 左志剛;升血小板藥使用注意[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報;2007年

10 記者 許琦敏;“鐵泵”蛋白幫助回收鐵元素[N];文匯報;2011年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 周赤燕;巨噬細胞MsrA對動脈粥樣硬化的干預研究[D];武漢大學;2013年

2 章桂忠;TIPE2蛋白調(diào)控細胞增殖和炎癥的機制研究[D];山東大學;2015年

3 張瑜;DKK1抑制巨噬細胞內(nèi)脂質(zhì)沉積及其相關分子機制[D];山東大學;2015年

4 孟濤;異丙酚對心臟收縮功能的抑制作用及其對巨噬細胞分泌功能調(diào)節(jié)的機制研究[D];山東大學;2015年

5 周興;基于酵母微囊構建新型口服巨噬細胞靶向遞送系統(tǒng)的研究[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

6 蔣興偉;Tim-3對巨噬細胞極化的調(diào)控機制研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2015年

7 劉伯玉;清道夫受體A介導小鼠巨噬細胞吞噬鉤端螺旋體研究[D];上海交通大學;2013年

8 楊紹俊;miRNA-155介導ESAT-6誘導巨噬細胞凋亡的分子機制及其在結核診斷中的作用[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

9 翟光耀;單核/巨噬細胞Ly6C~(low)亞群在心肌梗死后瘢痕形成期的抗炎特性研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2014年

10 韓露;TRB3介導的脂肪組織巨噬細胞極化與糖尿病冠狀動脈病變關系的研究[D];山東大學;2015年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 馬春梅;AP0E~(-/-)小鼠TLR9介導巨噬細胞極化效應對動脈粥樣硬化作用的研究[D];福建醫(yī)科大學;2015年

2 張譯丹;鹽皮質(zhì)激素受體拮抗劑調(diào)控巨噬細胞表型對實驗性矽肺的作用[D];河北醫(yī)科大學;2015年

3 盧文冉;HCV core蛋白作用的巨噬細胞培養(yǎng)上清對肝細胞生物學性狀的影響[D];河北醫(yī)科大學;2015年

4 李文建;載脂蛋白E影響巨噬細胞因子表達及分型的機制研究[D];河北醫(yī)科大學;2015年

5 曹爽;高糖對巨噬細胞TLR4信號轉(zhuǎn)導的調(diào)節(jié)作用[D];河北醫(yī)科大學;2015年

6 寧程程;腫瘤相關巨噬細胞在子宮內(nèi)膜癌雌激素敏感性中的作用及機制研究[D];復旦大學;2014年

7 高龍;PLD4在腫瘤相關巨噬細胞抑制結腸癌增殖中的作用研究[D];成都醫(yī)學院;2015年

8 任虹;感染期子宮頸癌U14細胞荷瘤小鼠抑制巨噬細胞CCL5分泌的機制研究[D];河北醫(yī)科大學;2015年

9 李美玲;雙酚A對小鼠腹腔巨噬細胞極化影響的體外研究[D];安徽醫(yī)科大學;2015年

10 劉瓊;黃芪多糖影響巨噬細胞向脂肪細胞趨化的作用及機制研究[D];新鄉(xiāng)醫(yī)學院;2015年

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