本文關(guān)鍵詞：染矽塵大鼠肺泡上皮細胞誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細胞分化研究

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【摘要】：目的觀察染矽塵大鼠肺泡上皮細胞(AEC)能否誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細胞(BMMSCs)分化為AEC。方法隨機取6只無特定病原體級健康雄性SD大鼠,以全骨髓貼壁法培養(yǎng)BMMSCs。隨機取同批大鼠6只,其中3只以1.0 m L質(zhì)量濃度為40 g/L的矽塵混懸液一次性氣管內(nèi)注入制作染矽塵模型,另3只注入0.9%氯化鈉溶液1.0 m L,上述2種大鼠均采用免疫粘附純化法培養(yǎng)AEC。設(shè)置實驗組(BMMSCs與染矽塵大鼠AEC共培養(yǎng))、對照A組(BMMSCs和正常大鼠AEC共培養(yǎng))和對照B組(BMMSCs單獨培養(yǎng)),于共培養(yǎng)第4和8天,以倒置顯微鏡觀察各組BMMSCs形態(tài)變化,對BMMSCs進行水通道蛋白5(AQP5)和表面活性蛋白C(SP-C)免疫熒光雙重染色,分別采用倒置熒光顯微鏡(IFM)和激光掃描共聚焦顯微鏡(LSCM)觀察其熒光表達,采用Image-pro plus 6.0圖像分析軟件分析2種蛋白的熒光積分光密度(IOD)。結(jié)果細胞共培養(yǎng)后,實驗組和對照A組的BMMSCs逐漸從長梭形向立方形和多邊形轉(zhuǎn)化,第8天時變化較第4天更明顯,對照A組BMMSCs形態(tài)變化無實驗組明顯,對照B組BMMSCs的形態(tài)無明顯變化。IFM和LSCM下,在共培養(yǎng)第4和8天,實驗組、對照A組BMMSCs均可見呈綠色熒光的AQP5和紅色熒光的SP-C表達,對照B組BMMSCs均可見少量AQP5綠色熒光表達,均無SP-C紅色熒光表達。2種顯微鏡下均觀察到,于共培養(yǎng)第4和8天,實驗組BMMSCs的2種蛋白熒光IOD值均較同時間點對照A組和對照B組增強(P0.01),對照A組BMMSCs的2種蛋白熒光IOD值均較同時間點對照B組增強(P0.01);實驗組和對照A組BMMSCs在共培養(yǎng)第8天時間點2種蛋白的熒光IOD值均較同組第4天時間點增強(P0.01)。結(jié)論染矽塵大鼠AEC能有效誘導(dǎo)BMMSCs分化成AEC。
【作者單位】： 貴州醫(yī)科大學(xué);廣東省職業(yè)病防治院廣東省職業(yè)病防治重點實驗室;廣東省婦幼保健院;
【關(guān)鍵詞】： 骨髓間充質(zhì)干細胞 肺泡上皮細胞 共培養(yǎng) 分化 顯微鏡 水通道蛋白 表面活性蛋白C 大鼠
【基金】：國家科技支撐計劃項目(2014BAI12B01) 國家自然科學(xué)基金(81302396) 國家臨床重點�？平ㄔO(shè)項目(2011-09) 廣東省職業(yè)病防治重點實驗室(2012A061400007)
【分類號】：R135.2
【正文快照】： 矽肺的重要病理過程是矽塵引起肺實質(zhì)細胞破壞導(dǎo)致Ⅰ型和Ⅱ型肺泡上皮細胞(Alveolar epithelialcell,AEC)減少、缺失及發(fā)展而成的肺纖維化[1-2]。骨髓間充質(zhì)干細胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)是一種易于分離、培養(yǎng),并具有多向分化潛能的細胞[3-4]。本課題組

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本文編號：991410