本文關(guān)鍵詞：Galangin對哮喘氣道重塑的影響及其機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 哮喘 Galangin 氣道重塑 TGF-β1 哮喘 Galangin ASMCs TGF-β1 ROS

【摘要】：第一部分Galangin對慢性哮喘小鼠模型氣道重塑的影響及機(jī)制研究【目的】探討Galangin對雞卵清蛋白(ovalbumin,OVA)誘導(dǎo)的慢性哮喘小鼠模型氣道重塑的影響及機(jī)制�！痉椒ā�48只SPF級BALB/c小鼠隨機(jī)分為對照組(control)、哮喘組(OVA)、低劑量Galangin(0.1 mg/kg)組(OVA+GL)、高劑量Galangin(0.5 mg/kg)組(OVA+GH)、地塞米松(1 mg/kg)組(OVA+DEX)和溶劑對照組(OVA+DMSO),每組8只。建立OVA誘導(dǎo)的慢性哮喘小鼠模型,于第0、7、14天腹腔內(nèi)注射OVA+氫氧化鋁凝膠致敏,自第16天起連續(xù)8周霧化激發(fā),每周3次,每次30分鐘。末次激發(fā)24小時(shí)后,取支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage,BALF)離心后計(jì)數(shù)總細(xì)胞數(shù)及分類細(xì)胞計(jì)數(shù);酶聯(lián)免疫吸附測定法分別檢測各組小鼠血清中OVA特異性Ig E和BALF中轉(zhuǎn)化生長因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的水平;取肺組織病理切片行蘇木精-伊紅(haematoxylin and eosin staining,HE)染色觀察肺組織氣管及血管周圍炎性細(xì)胞浸潤;過碘酸-雪夫(periodic acid-schiff,PAS)染色觀察杯狀細(xì)胞增生及粘液分泌;Masson染色觀察纖維增生;免疫組織化學(xué)法(immunohistochemistry,IHC)檢測α-平滑肌肌動蛋白(smooth muscle actin alpha chain,α-SMA)及基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metallopeptidase-9,MMP-9)蛋白的水平;蛋白質(zhì)印跡法(western blot)檢測肺組織中α-SMA、MMP-9及血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白的表達(dá)�！窘Y(jié)果】造模組(OVA組)小鼠可見明顯的氣道炎癥反應(yīng)和氣道重塑的病理表現(xiàn)。氣道及血管旁可見大量炎癥細(xì)胞浸潤;BALF中總細(xì)胞計(jì)數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)、巨噬細(xì)胞數(shù)及中性粒細(xì)胞數(shù)均顯著增加(P0.05);OVA+GH組及OVA+DEX組給藥后顯著抑制炎癥細(xì)胞的浸潤;降低BALF中的總細(xì)胞數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)、巨噬細(xì)胞數(shù)及中性粒細(xì)胞數(shù)(P0.05);造模組小鼠管腔內(nèi)可見粘液分泌增多、杯狀細(xì)胞增生,膠原沉積和纖維化(P0.05);而OVA+GH組及OVA+DEX組給藥后杯狀細(xì)胞增生及粘液分泌明顯減少,膠原沉積和纖維化的程度也明顯減輕(P0.05);造模組小鼠肺組織中α-SMA表達(dá)增加(P0.05);而OVA+GH組給藥后α-SMA表達(dá)下降(P0.05);造模組小鼠BALF中TGF-β1水平較正常組升高,VEGF和MMP-9蛋白表達(dá)上調(diào)(P0.05);OVA+GH組及OVA+DEX組給藥后降低BALF中TGF-β1水平,抑制VEGF和MMP-9蛋白在肺組織中的表達(dá)(P0.05)。【結(jié)論】Galangin可抑制OVA致敏的哮喘模型小鼠的慢性氣道炎癥和氣道重塑,推測其可能通過降低TGF-β1的水平、抑制VEGF和MMP-9的表達(dá)抑制氣道重塑,為哮喘的預(yù)防和治療提供了新的思路。第二部分Galangin對TGF-β1誘導(dǎo)的氣道平滑肌增殖的影響及機(jī)制研究【目的】探討Galangin對TGF-β1誘導(dǎo)的人氣道平滑肌細(xì)胞(airway smooth muscle cell,ASMC)增殖的影響及機(jī)制。【方法】體外培養(yǎng)原代人ASMCs。采用細(xì)胞計(jì)數(shù)(cell counting kit-8,CCK-8)法檢測不同濃度TGF-β1對人ASMC增殖的影響;CCK-8法檢測不同濃度Galangin對人ASMC活性的影響;CCK-8法和EDU法分別檢測Galangin對轉(zhuǎn)化生長因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)誘導(dǎo)的人ASMC增殖的影響;流式細(xì)胞術(shù)及共聚焦顯微鏡形態(tài)學(xué)分析檢測10μM Galangin、1 m M N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)及10 m M NAC對TGF-β1誘導(dǎo)的ASMCs產(chǎn)生活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平的影響;蛋白質(zhì)印跡法(western blot)檢測10μM Galangin對TGF-β1誘導(dǎo)的ASMCs中氧化酶(NADPH oxidase 4,Nox4)及抗氧化酶(超氧化物歧化酶[superoxide dismutase,SOD]和catalase)的表達(dá),并檢測相關(guān)通路(ERK,JNK及Akt)蛋白的表達(dá)�！窘Y(jié)果】CCK-8法結(jié)果發(fā)現(xiàn)1 ng/m L TGF-β1可誘導(dǎo)人ASMC增殖(P0.05);10μM Galangin給藥24和72小時(shí)后ASMC的細(xì)胞活力分別為90%和86%;10μM Galangin可抑制TGF-β1誘導(dǎo)的人ASMC增殖,將增殖率從124%±8%降至101%±2%(P0.05),而0.1μM和1μM Galangin抑制增殖的效應(yīng)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);EDU法檢測10μM Galangin抑制TGF-β1對人ASMCs的促增殖作用與CCK-8法的結(jié)果一致(P0.05);此外,1 ng/m L TGF-β1可誘導(dǎo)人ASMCs產(chǎn)生ROS增多(P0.05);10μM Galangin、1 m M NAC和10 m M NAC均能有效抑制ROS產(chǎn)生,降低ROS水平至溶劑對照組的79%,82%及62%,部分逆轉(zhuǎn)氧化/抗氧化失衡(P0.05);10μM Galangin還能降低TGF-β1誘導(dǎo)的人ASMCs中p-JNK、p-ERK、p-Akt的磷酸化水平,抑制MAPK等通路的激活(P0.05)�！窘Y(jié)論】Galangin可能通過TGF-ROS-MAPK通路,抑制TGF-β1誘導(dǎo)的人ASMC增殖,從而發(fā)揮抗重塑作用。
【關(guān)鍵詞】：哮喘 Galangin 氣道重塑 TGF-β1 哮喘 Galangin ASMCs TGF-β1 ROS
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R562.25
【目錄】：

• 主要英文縮略詞表5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-13
• 第一部分 Galangin對慢性哮喘小鼠模型氣道重塑的影響及機(jī)制研究13-38
• 前言13-15
• 材料與方法15-27
• 結(jié)果27-32
• 討論32-34
• 參考文獻(xiàn)34-38
• 第二部分 Galangin對TGF-β1 誘導(dǎo)的人氣道平滑肌細(xì)胞增殖的影響及機(jī)制研究38-56
• 前言38-39
• 材料與方法39-47
• 結(jié)果47-50
• 討論50-52
• 小結(jié)52
• 參考文獻(xiàn)52-56
• 綜述 氧化應(yīng)激對支氣管哮喘氣道重塑的影響56-66
• 參考文獻(xiàn)62-66
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況66-67
• 致謝67

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 管小俊;張維溪;李昌崇;鄭仰明;林立;葉樂平;陳小芳;羅運(yùn)春;蔡曉紅;董琳;張海鄰;周曉聰;;細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶和轉(zhuǎn)化生長因子β1在哮喘氣道重塑中的作用以及糖皮質(zhì)激素的調(diào)控[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2007年25期

2 李蓓;王敏;;β-轉(zhuǎn)化生長因子在哮喘氣道重塑中的作用[J];生命的化學(xué);2008年04期

3 鞏雪芳;薄建萍;陳俊艷;;堿性成纖維細(xì)胞生長因子在大鼠哮喘氣道重塑模型中的表達(dá)及地塞米松的干預(yù)作用[J];當(dāng)代醫(yī)學(xué);2010年04期

4 王堯;楊青;郭鋒;況九龍;李里香;;哮喘氣道重塑與氧化應(yīng)激的實(shí)驗(yàn)研究[J];華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2011年04期

5 朱清義;孫廣榮;劉向榮;潘玉娟;;基質(zhì)金屬蛋白酶-9及其組織抑制劑-1與哮喘氣道重塑[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2007年22期

6 龍發(fā);鐘雪鶯;張永昶;戚t熡，

本文編號：981717