本文關(guān)鍵詞：miR-21-5p拮抗肺泡Ⅱ型上皮細胞凋亡的分子機制

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【摘要】：目的：觀察miR-21-5p對過氧化氫（H2O2）誘導(dǎo)的肺泡Ⅱ型上皮細胞(TypeⅡalveolarepithelial cell,AEC-Ⅱ)凋亡的影響，探索其抗凋亡的分子機制。 方法：AEC-Ⅱ傳代培養(yǎng)分為正常對照組，H2O2損傷組（0.5mmol/L H2O2損傷后繼續(xù)培養(yǎng)），miR-21-5p腺病毒過表達組（miR-21-5p腺病毒載體轉(zhuǎn)染AEC-Ⅱ，轉(zhuǎn)染成功后，0.5mmol/L H2O2誘導(dǎo)凋亡模型），miR-21-5p陰性轉(zhuǎn)染組（不含miR-21-5p的腺病毒轉(zhuǎn)染AEC-Ⅱ，轉(zhuǎn)染成功后，0.5mmol/L H2O2誘導(dǎo)凋亡模型）；透射電子顯微鏡(transmitting electron microscopy,TEM)檢測細胞凋亡形態(tài)；于轉(zhuǎn)染48h用Taq Man實時熒光定量RT—PCR檢測各組AEC-Ⅱ的miR-21-5p表達水平；流式細胞術(shù)(FlowCytometry，F(xiàn)CM)于轉(zhuǎn)染6h、12h、24h、48h檢測各組細胞早期凋亡率；Western blot檢測每組Bcl-2，Bax，caspase-3三種蛋白的表達水平。 結(jié)果：(1) AEC-Ⅱ鑒定：電鏡下可見AEC-Ⅱ的特征性結(jié)構(gòu)——微絨毛及嗜鋨性板層小體。(2)細胞凋亡形態(tài)檢測：電鏡下可見胞質(zhì)回縮，染色質(zhì)凝聚、邊聚，細胞表面微絨毛稀少，嗜鋨性板層小體排空。(3) Taq Man實時熒光定量RT—PCR檢測各組AEC-Ⅱ的miR-21-5p水平：miR-21-5p過表達組與其他三組相比miR-21-5p的水平明顯增高(p0.05)，（4）細胞早期凋亡率檢測：與正常對照組比較，H2O2損傷組、miR-21-5p過表達組及miR-21-5p對照組的細胞凋亡率均隨損傷時間的延長逐漸上升；與H2O2損傷組比較，同一時間點miR-21-5p過表達組的細胞凋亡率明顯低于H2O2損傷組(p0.05)，miR-21-5p陰性對照組與H2O2損傷組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。（5）Western blot檢測各組AEC-ⅡBcl-2，Bax和caspase-3的表達：miR-21-5p過表達組Bax，caspase-3蛋白表達水平明顯低于H2O2損傷組(p 0.05)，，Bcl-2蛋白表達水平明顯高于H2O2損傷組(p 0.05)。 結(jié)論：(1) miR-21-5p具有抗AEC-Ⅱ凋亡作用。(2)以miR-21-5p作為AEC-Ⅱ凋亡調(diào)控的新靶點具有潛在應(yīng)用價值。(3)腺病毒載體是轉(zhuǎn)染AEC-Ⅱ的一種比較成功的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)載體。(4) miR-21-5p抗AEC-Ⅱ凋亡可能通過線粒體通路下調(diào)Bax，caspase-3蛋白表達水平明及上調(diào)Bcl-2蛋白表達水平有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：AEC-Ⅱ 凋亡 miR-21-5p 腺病毒 分子機制
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R563.8
【目錄】：

• 英漢縮略詞對照表4-5
• 中文摘要5-6
• Abstract6-7
• 前言7-10
• 材料與方法10-13
• 統(tǒng)計學(xué)分析13-14
• 結(jié)果14-21
• 討論21-24
• 結(jié)論24-25
• 參考文獻25-29
• 綜述：微小 RNA 在急性肺損傷中基因研究進展29-38
• 參考文獻34-38
• 致謝38-39
• 作者簡介39

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

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本文編號：917754