本文關(guān)鍵詞：CBD-VEGF對(duì)博來(lái)霉素誘導(dǎo)小鼠肺纖維化的影響及其機(jī)制研究

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【摘要】：目的： 研究膠原結(jié)合基-血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(collagen binding domain-vascular endothelialgrowth factor, CBD-VEGF)對(duì)博來(lái)霉素（bleomycin, BLM）致小鼠肺纖維化的干預(yù)作用，并探討其可能的作用機(jī)制。 方法： 1.小鼠肺纖維化模型的構(gòu)建：C57BL/6小鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組和肺纖維化模型組，模型組小鼠經(jīng)氣管內(nèi)一次性滴注BLM建立肺纖維化模型，于造模后第2、4、16周處死小鼠，HE、MASSON染色進(jìn)行組織病理學(xué)觀察，采用Ashcroft評(píng)分評(píng)價(jià)肺纖維化嚴(yán)重程度，同時(shí)免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）、Ⅰ型膠原（COL-Ⅰ）及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1（TGF-β1）的表達(dá)水平，采用半定量評(píng)分進(jìn)行比較。 2. CBD-VEGF對(duì)BLM致小鼠肺纖維化的干預(yù)：C57BL/6小鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、BLM+NS組、BLM+VEGF組。小鼠經(jīng)氣管內(nèi)一次性滴注BLM建立肺纖維化模型，BLM+VEGF組小鼠在造模后立即氣管內(nèi)滴注帶有His-tag的CBD-VEGF（2ug/100ul/只），假手術(shù)組、BLM+NS組小鼠滴注等體積生理鹽水。BLM+NS組、BLM+VEGF組部分小鼠在干預(yù)6小時(shí)后處死，免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)His-tag表達(dá)水平；其余小鼠分別于干預(yù)后第2、4、16周處死，第4、16周處死前行肺功能檢測(cè)；HE、MASSON染色進(jìn)行組織病理學(xué)觀察，Ashcroft評(píng)分評(píng)價(jià)肺纖維化嚴(yán)重程度；免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)TGF-β1、α-SMA及COL-Ⅰ的表達(dá)水平，采用半定量評(píng)分進(jìn)行評(píng)價(jià)；CD31染色進(jìn)行微血管計(jì)數(shù)（MVD）。 結(jié)果： 與假手術(shù)組相比，模型組HE、MASSON染色示肺內(nèi)結(jié)構(gòu)破壞，膠原蛋白沉積，Ashcroft評(píng)分顯著增高（P0.001）；免疫組化顯示，肺組織內(nèi)α-SMA和COL-Ⅰ染色面積和染色強(qiáng)度均明顯增強(qiáng)，半定量評(píng)分具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.001，P0.01）；TGF-β1表達(dá)水平在第2、4周時(shí)顯著升高（P0.05），第16周時(shí)，表達(dá)水平呈下降趨勢(shì)，與假手術(shù)組無(wú)顯著性區(qū)別。模型組內(nèi)比較，2、4、16周三個(gè)時(shí)間點(diǎn)Ashcroft評(píng)分及COL-Ⅰ表達(dá)水平無(wú)顯著差異；16周時(shí)α-SMA較4周時(shí)出現(xiàn)顯著下降。 與BLM+NS組相比，CBD-VEGF干預(yù)6小時(shí)后免疫組化顯示，BLM+VEGF組肺內(nèi)His-tag染色呈強(qiáng)陽(yáng)性，半定量評(píng)分具有極其顯著差異（P0.001），提示CBD-VEGF在肺內(nèi)廣泛分布；HE、MASSON染色示第2周時(shí)BLM+VEGF組肺內(nèi)結(jié)構(gòu)破壞更嚴(yán)重，膠原蛋白沉積更明顯，Ashcroft評(píng)分顯著增加（P0.05），第4、16周時(shí)則無(wú)明顯區(qū)別；肺功能檢測(cè)，第4、16周時(shí)BLM+VEGF組肺靜態(tài)順應(yīng)性均未出現(xiàn)好轉(zhuǎn)；免疫組化檢測(cè)示，CBD-VEGF可以促進(jìn)第2周時(shí)的TGF-β1、α-SMA和第4周時(shí)的COL-Ⅰ的表達(dá)，半定量評(píng)分具有顯著差異（P0.01，P0.01，P0.01）；MVD示，CBD-VEGF能夠促進(jìn)肺內(nèi)微血管生成，在第16周時(shí)，出現(xiàn)極其顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.001）。 BLM+VEGF組內(nèi)比較：4、16周小鼠Ashcroft評(píng)分及TGF-β1表達(dá)較2周時(shí)顯著下降，16周時(shí)α-SMA及COL-Ⅰ表達(dá)水平均較2周時(shí)顯著下降。 結(jié)論： 一次性氣管內(nèi)滴注BLM可成功構(gòu)建小鼠肺纖維化模型，形成的纖維化可持續(xù)存在，至16周時(shí)未觀察到明顯的自愈性。CBD-VEGF可以通過(guò)氣管滴注的方式到達(dá)肺部，，在纖維化早期通過(guò)促進(jìn)TGF-β1、α-SMA表達(dá)，刺激膠原蛋白沉積，加重肺纖維化。但CBD-VEGF又能夠促進(jìn)肺內(nèi)血管生成，隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)，其是否對(duì)纖維化具有一定的修復(fù)作用尚待進(jìn)一步研究。
【關(guān)鍵詞】：CBD-VEGF 博來(lái)霉素 肺纖維化 血管生成
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R563
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 前言10-14
• 第一部分 博來(lái)霉素誘導(dǎo)小鼠肺纖維化模型的構(gòu)建和評(píng)估14-27
• 材料與方法14-16
• 結(jié)果16-24
• 討論24-27
• 第二部分 CBD-VEGF 對(duì)博來(lái)霉素誘導(dǎo)小鼠肺纖維化的干預(yù)作用27-47
• 材料與方法27-29
• 結(jié)果29-42
• 討論42-47
• 結(jié)論47-48
• 本文的創(chuàng)新點(diǎn)48-49
• 參考文獻(xiàn)49-61
• 綜述61-72
• 參考文獻(xiàn)67-72
• 中英文縮略詞表72-73
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文73-74
• 致謝74-75

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

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本文編號(hào)：903773