發(fā)布時間：2017-09-23 06:29

  本文關鍵詞：CBD-VEGF對博來霉素誘導小鼠肺纖維化的影響及其機制研究

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【摘要】：目的： 研究膠原結合基-血管內(nèi)皮生長因子(collagen binding domain-vascular endothelialgrowth factor, CBD-VEGF)對博來霉素（bleomycin, BLM）致小鼠肺纖維化的干預作用，并探討其可能的作用機制。 方法： 1.小鼠肺纖維化模型的構建：C57BL/6小鼠隨機分為假手術組和肺纖維化模型組，模型組小鼠經(jīng)氣管內(nèi)一次性滴注BLM建立肺纖維化模型，于造模后第2、4、16周處死小鼠，HE、MASSON染色進行組織病理學觀察，采用Ashcroft評分評價肺纖維化嚴重程度，同時免疫組織化學染色檢測α-平滑肌肌動蛋白（α-SMA）、Ⅰ型膠原（COL-Ⅰ）及轉化生長因子-β1（TGF-β1）的表達水平，采用半定量評分進行比較。 2. CBD-VEGF對BLM致小鼠肺纖維化的干預：C57BL/6小鼠隨機分為假手術組、BLM+NS組、BLM+VEGF組。小鼠經(jīng)氣管內(nèi)一次性滴注BLM建立肺纖維化模型，BLM+VEGF組小鼠在造模后立即氣管內(nèi)滴注帶有His-tag的CBD-VEGF（2ug/100ul/只），假手術組、BLM+NS組小鼠滴注等體積生理鹽水。BLM+NS組、BLM+VEGF組部分小鼠在干預6小時后處死，免疫組織化學染色檢測His-tag表達水平；其余小鼠分別于干預后第2、4、16周處死，第4、16周處死前行肺功能檢測；HE、MASSON染色進行組織病理學觀察，Ashcroft評分評價肺纖維化嚴重程度；免疫組織化學染色檢測TGF-β1、α-SMA及COL-Ⅰ的表達水平，采用半定量評分進行評價；CD31染色進行微血管計數(shù)（MVD）。 結果： 與假手術組相比，模型組HE、MASSON染色示肺內(nèi)結構破壞，膠原蛋白沉積，Ashcroft評分顯著增高（P0.001）；免疫組化顯示，肺組織內(nèi)α-SMA和COL-Ⅰ染色面積和染色強度均明顯增強，半定量評分具有統(tǒng)計學差異（P0.001，P0.01）；TGF-β1表達水平在第2、4周時顯著升高（P0.05），第16周時，表達水平呈下降趨勢，與假手術組無顯著性區(qū)別。模型組內(nèi)比較，2、4、16周三個時間點Ashcroft評分及COL-Ⅰ表達水平無顯著差異；16周時α-SMA較4周時出現(xiàn)顯著下降。 與BLM+NS組相比，CBD-VEGF干預6小時后免疫組化顯示，BLM+VEGF組肺內(nèi)His-tag染色呈強陽性，半定量評分具有極其顯著差異（P0.001），提示CBD-VEGF在肺內(nèi)廣泛分布；HE、MASSON染色示第2周時BLM+VEGF組肺內(nèi)結構破壞更嚴重，膠原蛋白沉積更明顯，Ashcroft評分顯著增加（P0.05），第4、16周時則無明顯區(qū)別；肺功能檢測，第4、16周時BLM+VEGF組肺靜態(tài)順應性均未出現(xiàn)好轉；免疫組化檢測示，CBD-VEGF可以促進第2周時的TGF-β1、α-SMA和第4周時的COL-Ⅰ的表達，半定量評分具有顯著差異（P0.01，P0.01，P0.01）；MVD示，CBD-VEGF能夠促進肺內(nèi)微血管生成，在第16周時，出現(xiàn)極其顯著的統(tǒng)計學差異（P0.001）。 BLM+VEGF組內(nèi)比較：4、16周小鼠Ashcroft評分及TGF-β1表達較2周時顯著下降，16周時α-SMA及COL-Ⅰ表達水平均較2周時顯著下降。 結論： 一次性氣管內(nèi)滴注BLM可成功構建小鼠肺纖維化模型，形成的纖維化可持續(xù)存在，至16周時未觀察到明顯的自愈性。CBD-VEGF可以通過氣管滴注的方式到達肺部，，在纖維化早期通過促進TGF-β1、α-SMA表達，刺激膠原蛋白沉積，加重肺纖維化。但CBD-VEGF又能夠促進肺內(nèi)血管生成，隨著作用時間的延長，其是否對纖維化具有一定的修復作用尚待進一步研究。
【關鍵詞】：CBD-VEGF 博來霉素 肺纖維化 血管生成
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R563
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 前言10-14
• 第一部分 博來霉素誘導小鼠肺纖維化模型的構建和評估14-27
• 材料與方法14-16
• 結果16-24
• 討論24-27
• 第二部分 CBD-VEGF 對博來霉素誘導小鼠肺纖維化的干預作用27-47
• 材料與方法27-29
• 結果29-42
• 討論42-47
• 結論47-48
• 本文的創(chuàng)新點48-49
• 參考文獻49-61
• 綜述61-72
• 參考文獻67-72
• 中英文縮略詞表72-73
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表論文73-74
• 致謝74-75

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

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本文編號：903773