本文關(guān)鍵詞：TXNIP參與老年慢性阻塞性肺疾病氧化應(yīng)激的作用及分子機制研究

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【摘要】：目的:明確老年大鼠的年齡點;研究TXNIP在老年COPD大鼠模型及老年COPD患者中的表達(dá)變化;探討TXNIP/TRX1的表達(dá)失衡是否參與了老年COPD中氧化和抗氧化的失衡,從而為COPD的防治提供新的理論依據(jù)。方法:分為動物實驗和臨床實驗兩部分。(1)動物實驗:1)健康雄性SD大鼠40只,據(jù)月齡分為3月、6月、12月、18月、24月5個年齡組,每組8只。對各組大鼠進(jìn)行心臟彩超、腦電圖、肺功能的檢查,觀察各組大鼠心、肝、肺、腎、腦組織形態(tài)學(xué)變化并測定臟體比,取各組大鼠外周血檢測生化指標(biāo)包括心功能、肝功能、腎功能、血脂、血糖、血流變、凝血功能。用ELISA檢測各臟器組織勻漿、外周血及肺泡灌洗液中抗衰老因子Sirt1的蛋白表達(dá)水平。免疫印跡(western blot)分析各組大鼠肺組織中TXNIP的蛋白表達(dá)變化。明確老年大鼠年齡點。2)健康雄性SD大鼠64只,隨機將大鼠分為成年組(6月)和老年組,其中各組又分為對照組、COPD模型組、替米沙坦干預(yù)組、SAHA干預(yù)組,每組各8只,測定大鼠肺功能并觀察各組大鼠肺組織病理形態(tài)學(xué)改變;ELISA檢測大鼠外周血及肺泡灌洗液中ROS、TXNIP、TRX1的蛋白表達(dá),免疫組化和Western blot分析大鼠肺組織中TXNIP、TRX1的蛋白表達(dá)水平。(2)臨床實驗:手術(shù)切除肺癌患者肺組織標(biāo)本37例,所有患者術(shù)前均行肺功能檢測,據(jù)年齡分為成年組(65歲)和老年組(≥65歲),各組又分為對照組和COPD組。觀察各組患者肺組織病理形態(tài)學(xué)改變,免疫組化和Western blot檢測各組患者肺組織中TXNIP、TRX1的蛋白表達(dá)。收集60例COPD患者外周靜脈血,分為成年組(65歲)和老年組(≥65歲),另收集20例正常人的外周靜脈血,分為成年組(65歲)和老年組(≥65歲)。ELISA檢測各組患者外周血血清中ROS、TXNIP、TRX1的蛋白表達(dá)水平。將老年COPD組患者按照中華醫(yī)學(xué)會2012年版COPD診治指南進(jìn)行嚴(yán)重程度分級,分為輕中度組和重度組,ELISA檢測各組患者外周血血清中ROS、TXNIP、TRX1的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:1.動物實驗結(jié)果:(1)各月齡組大鼠在肺組織、腎臟、大腦海馬結(jié)構(gòu)上的形態(tài)學(xué)改變隨著年齡增加有顯著變化,而各月齡組大鼠心臟、肝臟各臟器在形態(tài)學(xué)上組之間無顯著差別。較其他月齡組大鼠相比,24月齡組大鼠在功能學(xué)方面的檢測包括臟體比、肺功能、心臟彩超、腦電圖各頻段值中的各項檢測指標(biāo)均下降(P0.05)。(2)相比其他月齡組,24月齡組中抗衰老因子Sirt1的表達(dá)在大鼠肺、腦、腎組織勻漿、肺泡灌洗液及外周血血清中表達(dá)減少(P0.05)。Western bolt結(jié)果顯示24月齡組中TXNIP的蛋白表達(dá)水平較其他月齡組升高(P0.05);(3)COPD組大鼠肺功能指標(biāo)(FEV0.3、FEV0.3/FVC%、PEF)較對照組降低(P0.05),SAHA干預(yù)組肺功能指標(biāo)較COPD組降低(P0.05),替米沙坦組較COPD組升高(P0.05),較對照降低(P0.05)。老年組與成年組相比,大鼠肺功能指標(biāo)均降低,但無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。COPD模型組大鼠肺部病理學(xué)改變符合COPD的形態(tài)學(xué)特征,替米沙坦組大鼠肺組織病理改變較COPD組明顯改善,而SAHA干預(yù)組大鼠肺組織病理改變較COPD組明顯加重,總而言之,老年組大鼠肺組織病理改變較成年組明顯惡化。(4)ROS蛋白表達(dá)水平在COPD組較對照組顯著增高(P0.05),在替米沙坦組較COPD組降低(P0.05),SAHA干預(yù)組較COPD組增高(P0.05)。ROS在老年組較成年組增多(P0.05)。(5)免疫組化結(jié)果顯示TXNIP主要表達(dá)于肺泡上皮細(xì)胞和肺間質(zhì)細(xì)胞,TXNIP在胞漿和胞核均有免疫著色。Western blot結(jié)果顯示COPD組大鼠肺組織中的TXNIP、TRX1蛋白表達(dá)較對照組高(P0.05),替米沙坦干預(yù)組中TXNIP蛋白表達(dá)水平較COPD組減少(P0.05),TRX1表達(dá)較COPD組增多(P0.05),SAHA干預(yù)組TXNIP表達(dá)較COPD組增多(P0.05),TRX1表達(dá)較COPD組減少(P0.05)。而老年組相比成年組,TXNIP蛋白表達(dá)增多(P0.05),TRX1表達(dá)減少(P0.05)。(6)ELISA顯示COPD組大鼠血及肺泡灌洗液中的TXNIP、TRX1蛋白表達(dá)較對照組高(P0.05),相比COPD組,替米沙坦干預(yù)組中TXNIP表達(dá)減少(P0.05),TRX1表達(dá)增多(P0.05),而SAHA干預(yù)組TXNIP表達(dá)增多(P0.05),TRX1表達(dá)減少(P0.05)。而老年組相比成年組,TXNIP蛋白表達(dá)增多(P0.05),TRX1表達(dá)減少(P0.05)。2.臨床實驗結(jié)果:(1)免疫組化結(jié)果顯示人肺組織中TXNIP主要表達(dá)于肺泡上皮細(xì)胞和肺間質(zhì)細(xì)胞。TXNIP在胞漿和胞核均有免疫著色。Western blot結(jié)果顯示COPD組人肺組織中TXNIP、TRX1蛋白表達(dá)水平較對照組高(P0.05),老年組與成年組比較,老年組中的TXNIP蛋白表達(dá)增多(P0.05),TRX1表達(dá)減少(P0.05)。(2)ELISA結(jié)果顯示人外周血血清中COPD組中的ROS、TXNP、TRX1蛋白表達(dá)水平較對照組高(P0.05),老年組與成年組比較,老年組中的ROS、TXNIP蛋白表達(dá)增多(P0.05),TRX1表達(dá)減少(P0.05)。(3)ELISA檢測結(jié)果顯示老年COPD重度組外周血血清中ROS、TXNIP蛋白表達(dá)水平較輕中度組增高(P0.05),而TRX1蛋白表達(dá)較輕中度組減少(P0.05)。(4)直線相關(guān)分析顯示TXNIP和FEV1(%)、ROS呈正相關(guān)(P0.05),與TRX1蛋白表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)(P0.05)。結(jié)論:1.明確24月齡大鼠為老齡大鼠。2.TXNIP隨著年齡的增加及病情的加重而升高。在COPD早期階段抗氧化酶TRX1可能代償性上調(diào)以抵抗氧化應(yīng)激,而隨著年齡的增加及COPD嚴(yán)重程度的加深TRX1逐漸失代償呈進(jìn)行性下調(diào)。在一定程度上反應(yīng)了疾病的活動度。3.TXNIP和TRX1活化可能引起老年COPD氧化/抗氧化失衡,在吸煙等促使氧化應(yīng)激發(fā)生的條件下,老年COPD中TXNIP表達(dá)增加,TRX1表達(dá)減少,兩者表達(dá)失衡可能導(dǎo)致ROS含量增加而加劇了機體的氧化損傷。4.檢測TXNIP和TRX1的表達(dá)水平對老年COPD的病情嚴(yán)重程度的評估具有重要意義。
【關(guān)鍵詞】：維生素D3上調(diào)蛋白1 硫氧還蛋白1 氧化應(yīng)激 老年慢性阻塞性肺疾病
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R563.9
【目錄】：

• 摘要4-9
• Abstract9-18
• 主要縮略語18-19
• 前言19-23
• 材料與方法23-33
• 實驗結(jié)果33-45
• 討論45-51
• 結(jié)論51-53
• 參考文獻(xiàn)53-57
• 附圖57-67
• 綜述67-77
• 參考文獻(xiàn)73-77
• 成果目錄77-79
• 致謝79

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本文編號：894067