本文關(guān)鍵詞：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞調(diào)節(jié)樹突狀細(xì)胞自噬改善哮喘的機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 間充質(zhì)干細(xì)胞 支氣管哮喘 樹突狀細(xì)胞 自噬

【摘要】：實驗?zāi)康?探索樹突狀細(xì)胞的自噬與哮喘發(fā)生發(fā)展的相關(guān)機(jī)制,并進(jìn)一步研究BMMSCs對樹突狀細(xì)胞的自噬與功能的影響。實驗方法:一、首先明確哮喘模型肺源DCs自噬水平的高低;將BALB/c小鼠分為急性哮喘組和空白對照組:哮喘組利用卵清蛋白(OVA)誘導(dǎo)建立小鼠過敏性哮喘模型。H-E染色觀察各組小鼠肺組織的病理改變,酶聯(lián)免疫吸附實驗、蛋白質(zhì)印跡實驗分別檢測各組小鼠血清OVA特異性Ig E、BALF的IL4/13因子的表達(dá)水平、肺DCs自噬水平。二、深入探索調(diào)節(jié)樹突狀細(xì)胞的自噬對哮喘的影響:1、將BALB/c小鼠分為3組:急性哮喘組(哮喘組)、哮喘自噬抑制劑CQ治療組(CQ組)和空白對照組(對照組),其中哮喘組和CQ組利用卵清蛋白(OVA)誘導(dǎo)建立小鼠過敏性哮喘模型,CQ組加用自噬抑制劑氯喹(CQ)進(jìn)行激發(fā)前干預(yù)。H-E染色觀察各組小鼠肺組織的病理改變,酶聯(lián)免疫吸附實驗、蛋白質(zhì)印跡實驗、流式細(xì)胞儀分別檢測各組小鼠血清OVA特異性Ig E、肺DCs自噬水平及表面共刺激分子、MHCⅡ的表達(dá)水平。2、體外用自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤(3MA)抑制C57/B6小鼠骨髓源DCs自噬,檢測DCs表面共刺激分子、MHCⅡ的表達(dá)。3、獲取OT2小鼠脾臟CD4+T淋巴細(xì)胞,與各組DCs以1:10的比例混勻,流式細(xì)胞儀檢測T細(xì)胞的增殖情況與活化反應(yīng)。三、進(jìn)一步探討B(tài)MMSCs對樹突狀細(xì)胞的自噬與功能的影響:1、BALB/c小鼠分為空白對照組、哮喘組、MSCs細(xì)胞治療組(MSC組)3組,其中哮喘組和MSC組利用卵清蛋白(OVA)誘導(dǎo)建立小鼠過敏性哮喘模型,MSC組于激發(fā)前一天尾靜脈注射MSCs細(xì)胞混懸液。H-E染色觀察各組小鼠肺組織的病理改變,酶聯(lián)免疫吸附實驗分別檢測各組小鼠血清OVA特異性Ig E、肺泡灌洗液的IL4/13因子的表達(dá)水平。2、骨髓來源的DCs分為對照組(CON組)、LPS預(yù)處理DCs組(LPS-DC組)及MSCs與DCs共培養(yǎng)組(MSC-DC組),再分別收取各組DCs后行流式細(xì)胞術(shù)檢測DCs表面CD40、CD86、MHCⅡ表達(dá)水平體,蛋白質(zhì)印跡實驗檢測各組DCs自噬水平。3、獲取OT2小鼠脾臟CD4+T淋巴細(xì)胞,與各組DCs以1:10的比例混勻,流式細(xì)胞儀分析T細(xì)胞的增殖情況。實驗結(jié)果:一、哮喘小鼠肺DCs自噬水平升高:1、哮喘組小鼠肺炎浸潤明顯,血清OVA特異性Ig E水平、BALF IL-4和IL-13因子水平高于對照組(P均0.05);2、哮喘組肺DCs的LC3Ⅱ/Ⅰ及LC3Ⅱ/ACTIN比率均高于對照組,哮喘組肺DCs自噬水平比對照組升高明顯。二、抑制樹突狀細(xì)胞的自噬改善哮喘病情:1、哮喘組小鼠血清OVA特異性Ig E水平高于對照組(P0.05),而CQ組血清OVA特異性Ig E水平較哮喘組降低(P0.05);2、HE染色:哮喘組小鼠血管周圍及細(xì)支氣管有大量炎性細(xì)胞浸潤,部分肺泡的間隔有增寬及斷裂,炎癥浸潤多于對照組;而與哮喘組相比,CQ組血管和支氣管周圍炎癥細(xì)胞浸潤明顯減少;3、自噬的檢測:哮喘組肺DCs的LC3Ⅱ/Ⅰ及LC3Ⅱ/ACTIN比率均高于對照組;而較于哮喘組,CQ組肺DCs的LC3Ⅱ/Ⅰ及LC3Ⅱ/ACTIN比率均降低,說明哮喘組肺DCs自噬比對照組高,而CQ組肺DCs的自噬較哮喘組下降;4、相比對照組,哮喘組肺DCs表面共刺激分子CD80、CD86及MHCⅡ均升高(P0.05);CQ組與哮喘組相比CD86及MHCⅡ均降低(P0.05),CD80也有下降趨勢(P0.05);5、與對照組相比,OVA組DCs表面共刺激分子CD40、CD86及MHCⅡ均升高(P0.05),3MA組與OVA組相比CD86及MHCⅡ均降低(P0.05),CD40也呈現(xiàn)下降趨勢(P0.05);6、相較于對照組,哮喘組肺DCs誘導(dǎo)的CD4+T細(xì)胞增殖增加(P0.05),而CQ組與哮喘組相比肺DCs誘導(dǎo)的T細(xì)胞增殖降低(P0.05),說明抑制DCs自噬能降低DCs誘導(dǎo)的OT2小鼠T細(xì)胞的增殖能力;7、哮喘組T細(xì)胞CD69的表達(dá)水平高于對照組(P0.05),而CQ組T細(xì)胞CD69比哮喘組低(P0.05),說明自噬抑制劑可以降低T細(xì)胞活化反應(yīng)三、BMMSCs抑制DCs的自噬與功能,并改善哮喘:1、哮喘組小鼠血清OVA特異性Ig E水平高于對照組(P0.05),而MSC組血清OVA特異性Ig E水平較哮喘組降低(P0.05);2、HE染色:哮喘組小鼠肺有大量炎性細(xì)胞浸潤,部分肺泡間隔有增寬及斷裂,炎癥浸潤多于對照組;而與哮喘組相比,MSC組肺內(nèi)炎性細(xì)胞浸潤明顯減少;3、哮喘組BALF中IL-4和IL-13因子的量比對照組要高(P0.05),哮喘MSCs治療組BALF中IL-4和IL-13因子比哮喘組下降(P0.05);4、自噬的檢測:LPS-DCs的LC3Ⅱ/Ⅰ及LC3Ⅱ/ACTIN比率均高于對照組(P0.05);而較于LPS-DCs組,MSC-DCs的LC3Ⅱ/Ⅰ及LC3Ⅱ/ACTIN比率均降低(P0.05),說明MSC-DCs的自噬較LPS-DCs組下降;5、MSC-DCs組與LPS-DCs相比,表面分子CD40及MHCⅡ均降低(P0.05);6、LPS-DCs誘導(dǎo)的T細(xì)胞增殖增加,而MSC-DC組與LPS-DCs組相比誘導(dǎo)的T細(xì)胞增殖降低,說明MSCs能降低DCs誘導(dǎo)的OT2小鼠T細(xì)胞的增殖能力。實驗結(jié)論:1、哮喘小鼠肺DCs自噬水平升高明顯;2、自噬抑制劑可改善哮喘氣道炎癥,并抑制過敏性哮喘肺DCs的自噬,下調(diào)DCs表面共刺激分子及MHCⅡ的表達(dá)以及DCs誘導(dǎo)T細(xì)胞增值的能力;3、BMMSCs可抑制骨髓源DCs的自噬,下調(diào)DCs表面共刺激分子及MHCⅡ的表達(dá)以及DCs誘導(dǎo)T細(xì)胞增值的能力,并改善哮喘病情。
【關(guān)鍵詞】：間充質(zhì)干細(xì)胞 支氣管哮喘 樹突狀細(xì)胞 自噬
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R562.25
【目錄】：

• 摘要6-9
• ABSTRACT9-12
• 主要英文縮寫詞表12-13
• 緒論13-21
• 參考文獻(xiàn)17-21
• 第一部分 肺樹突狀細(xì)胞自噬與急性支氣管哮喘的關(guān)系21-32
• 一、材料與方法21-23
• 二、實驗方法23-25
• 三、實驗結(jié)果25-29
• 四、實驗結(jié)論29
• 五、實驗討論29-30
• 參考文獻(xiàn)30-32
• 第二部分 調(diào)節(jié)樹突狀細(xì)胞的自噬對支氣管哮喘的影響32-47
• 一、材料與方法32-34
• 二、實驗方法34-38
• 三、實驗結(jié)果38-44
• 四、實驗結(jié)論44
• 五、實驗討論44-46
• 參考文獻(xiàn)46-47
• 第三部分 BMMSCS抑制樹突狀細(xì)胞的自噬改善小鼠哮喘病情47-67
• 一、材料與方法47-49
• 二、實驗方法49-57
• 三、實驗結(jié)果57-62
• 四、實驗結(jié)論62
• 五、實驗討論62-64
• 參考文獻(xiàn)64-67
• 總結(jié)67-68
• 綜述：PI-9/SPI-6 與哮喘相關(guān)免疫細(xì)胞68-74
• 參考文獻(xiàn)71-74
• 碩士在讀期間科研項目與論文74-76
• 致謝76-77

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 曹足;潘頻華;譚洪毅;覃慶武;王展;蘇曉麗;胡成平;;抗神經(jīng)生長因子抗體對支氣管哮喘小鼠肺組織自噬水平的影響[J];中華結(jié)核和呼吸雜志;2014年07期

2 梁瑞韻;伍衛(wèi);黃瑾;尹柯;江山平;;地塞米松對哮喘患者外周血CD4~+和CD8~+T淋巴細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用[J];中山大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)科學(xué)版);2009年S4期

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本文編號：835605