本文關鍵詞：miR-29b在特發(fā)性肺間質纖維化中的抗纖維化作用

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【摘要】：前言特發(fā)性肺間質纖維化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)是一種原因不明、出現(xiàn)在成人、局限于肺、進行性致纖維化的間質性肺炎。肺泡上皮細胞的損傷,導致上皮-間充質轉化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)發(fā)生,可使細胞外基質蛋白(extracellular matrix,ECM)大量產(chǎn)生增多,導致ECM過度積聚,,肺泡結構破壞,最終導致肺間質纖維化發(fā)生和肺功能受損。micro RNA-29b(mi R-29b)是一個與纖維化疾病緊密相關的mi RNA,在多器官臟器纖維化調(diào)控中發(fā)揮著至關重要的作用。mi R-29b可直接抑制多種膠原蛋白表達,參與包括TGF-β/Smad在內(nèi)的多條與EMT相關信號通路的調(diào)控,在ECM的異常積聚所導致的纖維化中扮演著不可或缺的重要作用。提示mi R-29b具有阻止纖維化發(fā)生發(fā)展的可能性,具有一定程度的抗纖維化潛能。本研究通過將mi R-29b的類似物(mimic)轉染至體外培養(yǎng)的人肺泡上皮細胞中,探討上調(diào)mi R-29b表達對肺泡上皮細胞中EMT發(fā)生發(fā)展的影響。方法1.體外培養(yǎng)人胚肺泡上皮細胞2.實時熒光定量PCR(Real-time PCR)檢測mi R-29b表達水平,以及細胞上皮(E-cad)和間質細胞標志物(α-SMA和COL1A1)的m RNA表達水平3.Western blot方法檢測Smad3蛋白及其磷酸化(p-Smad3)的表達,以及細胞上皮(E-cad)和間質細胞標志物(α-SMA和COL1A1)的蛋白表達4.統(tǒng)計學處理采用SPSS 17.0統(tǒng)計學軟件對所有實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計處理,實驗數(shù)據(jù)均以SX±表示,各組之間采用單因素方差分析,兩組之間兩兩比較采用LSD-t檢驗。P0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。結果1.TGF-β1誘導組細胞由正常的鵝卵石形或多角形轉變?yōu)樗笮�、紡錘形,細胞間連接變松散,呈現(xiàn)間充質細胞形態(tài);mi R-29b轉染組細胞形態(tài)對比TGF-β1誘導組細胞形態(tài)有明顯改變,呈現(xiàn)類似鵝卵石形或多角形上皮形態(tài),而NC組細胞形態(tài)仍呈間充質細胞形態(tài),對比TGF-β1誘導組無明顯變化。2.與空白對照組比較,TGF-β1誘導組E-cad m RNA表達顯著下降,α-SMA和COL1A1 m RNA表達顯著升高,提示經(jīng)TGF-β1誘導發(fā)生EMT。與TGF-β1誘導組比較,mi R-29b轉染組轉染mi R-29b mimic 48h后,mi R-29b表達升高(P0.05)。E-cad m RNA表達升高,α-SMA和COL1A1 m RNA表達下降,對比TGF-β1誘導組差異均具有統(tǒng)計學意義(P0.01);而NC組E-cad、α-SMA和COL1A1 m RNA表達無明顯變化,對比TGF-β1誘導組差異均無統(tǒng)計學意義(P0.05)。3.與空白對照組比較,TGF-β1誘導組的E-cad蛋白表達明顯減少,磷酸化Smad3蛋白(p-Smad3)、α-SMA和COL1A1蛋白表達明顯增高,提示經(jīng)TGF-β1誘導發(fā)生EMT;與TGF-β1誘導組比較,mi R-29b轉染組的E-cad蛋白表達增高,p-Smad3、α-SMA和COL1A1蛋白表達減少,對比TGF-β1誘導組差異均具有統(tǒng)計學意義(P0.01);而NC組E-cad、p-Smad3、α-SMA和COL1A1蛋白表達無明顯變化,對比TGF-β1誘導組差異均無統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論mi R-29b表達水平上調(diào),可對發(fā)生EMT的IMR-90細胞中TGF-β/Smad信號通路產(chǎn)生一定程度的抑制作用,顯示了mi R-29b具有抗纖維化潛能。
【關鍵詞】：miR-29b 特發(fā)性肺間質纖維化 轉化生長因子β1 Smad3
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R563
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 英文縮略詞11-12
• 1 前言12-15
• 2 實驗材料15-20
• 3 實驗方法20-28
• 4 結果28-33
• 5 討論33-38
• 6 結論38-39
• 參考文獻39-43
• 綜述43-65
• 參考文獻57-65
• 致謝65-66
• 個人簡歷及在學期間發(fā)表的學術論文與研究成果66

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 梁艷;王皓;楊再興;仲人前;;上皮間質轉化在纖維化疾病中的研究進展[J];中國實驗診斷學;2013年08期

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本文編號：834715